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目的1.探讨食管鳞癌细胞中LSD1激活状态及与Notch3信号通路的相互调控关系。2.探讨新合成LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞增殖的影响及可能的分子作用机理。方法1.Western blots分别检测五株分化程度不同的食管鳞癌细胞株KYSE450,KYSE750,EC9706,Eca109,TE1中LSD1及Notch信号通路中Notch1、Notch3、CSL蛋白表达情况。2.荧光定量PCR检测五株分化程度不同的食管鳞癌细胞株中LSD1 m RNA的表达情况。3.CCK-8法检测新合成LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞增殖的影响。4.分别用LSD1抑制剂(不同浓度和不同时间)处理食管鳞癌Eca109和TE1细胞,Western blots观察处理前后细胞中LSD1及Notch信号通路中的Notch3、CSL蛋白表达变化情况。5.Western blots检测不同浓度LSD1抑制剂对ECa109细胞中组蛋白表达的影响。6.Western blots检测单用Notch通路抑制剂GSI或GSI与LSD1抑制剂联用对Eca109细胞中Notch通路蛋白及组蛋白表达影响。7.用LSD1-sh RNA下调ECa109细胞中LSD1水平后,Western blots检测Notch3及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达变化情况。结果1.Western blots结果显示,LSD1及Notch蛋白在不同的食管鳞癌细胞株中的表达存在差异。在Notch3高表达的食管鳞癌细胞株ECa109中,LSD1也呈现高表达,两者呈现正相关。2.荧光定量PCR结果显示,LSD1 mRNA在不同的食管鳞癌细胞株中的表达也存在差异。3.CCK-8结果显示,LSD1抑制剂处理后,食管鳞癌细胞增殖活性降低。4.LSD1抑制剂处理细胞后,Notch3蛋白的表达水平降低,LSD1蛋白的表达无明显变化,而组蛋白H3K9me2的表达水平升高,且具有剂量依赖性。5.GSI处理细胞后,Notch3、LSD1、Bcl-2蛋白表达水平降低。6.GSI联用LSD1抑制剂后,Notch3、LSD1蛋白及组蛋白H3K4me2表达均明显降低。7.LSD1-sh RNA下调ECa109细胞中LSD1表达后,Notch3及Bcl-2蛋白的表达明显降低。结论1.食管鳞癌细胞中均存在LSD1过表达情况,但其表达与细胞分化没有明显相关性。2.本课题组新合成LSD1抑制剂能够抑制食管鳞癌细胞增殖。3.LSD1对Notch3通路具有调控作用:在Notch3通路激活及失活的状态下,抑制LSD1均可下调Notch3蛋白的表达,前者可能通过促进H3K9me2的去甲基实现,而后者可能通过调控H3K4me2的甲基化水平实现。