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肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，在我国肺癌的死亡率还在呈现上升趋势。目前已确定在人类多种恶性肿瘤中，部分肿瘤抑制基因转录失活是与DNA甲基化密切相关。因此，异常甲基化就成为继基因缺失和突变之后，引起肿瘤抑制基因功能失活的另一重要途径。 为了深入探讨人类肺癌发病的相关机理，并为以后的临床应用提供相应依据，我们在军事医学科学院二所四室建立的α-粒子照射诱发人支气管上皮细胞BEP2D癌变细胞克隆实验模型的基础上，研究了癌变细胞中部分与细胞增殖、凋亡、有丝分裂检测点及DNA修复相关的基因启动子区CpG岛的甲基化情况，并进一步分析了与细胞周期密切相关基因的mRNA转录水平。 本实验应用甲基化特异性的PCR（MSP）方法研究了与细胞周期调节有关的p16INK4a、p14ARF，与DNA修复有关的MGMT，解毒基因GSTP1，与有丝分裂检测点相关的基因BUB3和与细胞凋亡相关的DAPK基因5’启动子区CpG岛的甲基化情况，并用RT-PCR检测了p14ARF基因转录水平。 结果发现p14ARF基因5’启动子区CpG岛在BEP2D细胞中没有甲基化，但在其癌变细胞BERP35T1中发生了甲基化，为进一步探讨5’启动子区CpG岛甲基化对基因转录的影响，我们采用 丫卜汲徽’fF)t训【I论义 小义纵出 RT PCR万法扩增…4肌’”基因的郡分外显子，并对其表达进行半定 量分析，结果与我们设想的吻合，出现了 pl4M’基因的转录水平显 著下降；而与pl4朋”基因共用 2个外显子的… 毗的基因在两种细 胞的5’后动子区印G岛都未发生甲基化；MGMT基因在BEPZD 细胞和癌变细胞sERP3sTI中s’启动子区QG岛都发生了甲基｛乙； DAPK基因在BEPZD 细包中5’启动子区印G岛已有部分甲基化， 在BEop35TI细胞中冗全甲基化；GSTPI基因在BEPZD细胞中未 出现甲基化，在BERP35TI 细胞中发生了邢分甲基化；Bm3基因 在BEPZD 和BERP35TI 细包中均未发生甲基化。为了证明本实验 方法的可靠性，我fl1对经盯R扩增的 BUB3基因进行回收，并转 染到细菌中克隆，进行测序，显示扩增的碱基序列中全部C均转变 成T，即未发生甲基化，从而证实我们的实验操作是可靠的。 我们的实验发现，在辐射诱发人支气管上皮细胞恶性转化中， 部分与细胞增殖、DNA修复和细胞凋亡相关的功能基因在5’启动 子区CpG岛上发生了甲基化，并由止匕抑制了基因的转录。