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近年来,因流感病毒侵害,人类健康和动物产品工业每年都要蒙受巨大损失。传统的流感疫苗生产多采用鸡胚培养过程,但该生产过程具易受微生物污染、内毒素残余量高、对流感大流行应急能力差等缺点,因此动物细胞制病毒疫苗工业的发展变得尤为重要。MDCK细胞具有培养容易、增殖快、流感病毒感染效率高等特点,是适合用作流感病毒疫苗生产的重要细胞系之一本文在自制无血清培养基Self-SFM基础上成功开发了适合MDCK细胞无血清培养的培养基MDCK-SFM,细胞比生长速率、细胞活力和细胞密度与有血清培养过程相当。通过调整MDCK-SFM培养基成分,研制出了适合MDCK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基MDCK-SHP和低蛋白无血清培养基MDCK-SLP,成功驯化出了适合无血清单细胞悬浮培养的细胞ssf-MDCK。在无血清培养基MDCK-SHP中培养ssf-MDCK细胞,细胞密度可达38.05×105cells/mL,最大比生长速率可达0.056 h-1；在低蛋白无血清培养基MDCK-SLP中细胞密度可达22.94×105cells/mL,最大比生长速率可达0.050 h-1。另外,利用该MDCK细胞无血清悬浮培养体系,对MDCK细胞生产流感病毒疫苗过程中的操作参数进行了初步优化,在整个细胞培养和病毒疫苗生产过程中无需更换培养基,在病毒感染过程中需添加TPCK-胰酶,感染时TOI为50 h,MOI为0.1,感染病毒48 h后收获病毒液,在无血清培养基MDCK-SHP和低蛋白无血清MDCK-SLP中获得的病毒液的TCID50滴度值分别为1010.85±0.81 TCID50/mL和1011.43±0.73 TCID50/mL。为开发和建立MDCK单细胞无血清悬浮培养体系大规模生产流感病毒疫苗奠定了基础。