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目的研究Snail介导的上皮间质转化（EMT）在食管癌血管生成拟态（VM）中的作用,探索加味通幽汤通过影响EMT对食管癌VM的干预机制。方法1.加味通幽汤药物制备:采用醇提水沉法,无水乙醇浸5周,离心取上清,沸水浴中浓缩至稠膏状,二甲基亚砜（DMSO）溶解。2.实验分组:常氧对照组、常氧药物组、缺氧对照组和缺氧药物组。3.采用CoCl2诱导液建立Eca109细胞缺氧模型,采用CCK-8法确定药物对细胞的半数抑制浓度（IC50）。4.采用PAS染色,观察各组细胞形态差异及加味通幽汤的影响。5.通过细胞划痕实验观察各组细胞迁移能力差异;6.通过Transwell小室实验观察各组细胞的侵袭能力差异。7.采用免疫荧光技术观察各组细胞Snail与HIF-1α表达相关程度差异性。8.采用Western Blot法观察各组对细胞Snail、HIF-1α、E-cadherin、Vimentin、VE-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达情况,利用图像分析软件半定量分析各组蛋白表达差异。9.采用实时荧光定量RT-PCR法观察各组细胞Snail因子的m RNA表达差异。结果1 CCK-8显示加味通幽汤对Eca109细胞的IC50=71611μg/m L。2细胞PAS染色结果显示,与常氧对照组相比较,缺氧对照组细胞呈明显条索状;经药物干预后,细胞较分散,管状结构消失。3细胞划痕实验显示,24h后常氧对照组细胞划痕间隙为（362.81±1.11）μm,缺氧对照组细胞划痕间隙为（250.86±7.88）μm,常氧药物组细胞划痕间隙为（404.46±5.71）μm,药物在常氧和缺氧环境下均可抑制细胞迁移。4 Transwell小室实验显示,24h后常氧对照组50%视野细胞侵袭、缺氧对照组近100%视野细胞侵袭;常氧和缺氧环境下,药物均可抑制细胞侵袭。5免疫荧光结果显示,常氧对照组、缺氧对照组Snail荧光强度相对值分别为（1.15±0.00）和（1.45±0.01）,HIF-1α分别为（1.02±0.01）和（1.36±0.01）,缺氧对照组两指标均升高,差异有统计学意义（P<0.05）;缺氧药物组Snail荧光强度相对值为（0.89±0.01）,HIF-1α为（0.83±0.01）,与缺氧对照组比较,两指标均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。6 Western Blot检测:缺氧对照组与常氧对照组相比,Snail、HIF-1α、VE-cadherin、MMP-2、MMP-9、Vimentin表达升高,E-cadherin表达降低;差异均有统计学意义（P<0.01）;缺氧和常氧环境下,与对照组比较,药物组Snail、HIF-1α、VE-cadherin、MMP-2、MMP-9、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调;差异均有统计学意义（P<0.01）。7 RT-PCR检测显示,与常氧对照组相比,缺氧对照组细胞Snail基因表达活性明显增强;差异均有统计学意义（P<0.01）;缺氧和常氧环境下,与对照组比较,药物组细胞Snail基因表达活性下降;差异均有统计学意义（P<0.01）。结论1.缺氧微环境促进食管癌Eca109细胞VM的形成,并且与Snail介导的EMT关系密切。2.常氧、缺氧微环境下,加味通幽汤均可抑制食管癌Eca109细胞增殖,进而抑制细胞侵袭和转移。3.常氧、缺氧微环境下,加味通幽汤抑制食管癌Eca109细胞增殖、侵袭和转移与调节Snail介导的EMT、HIF-1α诱导的VM关系密切。图13幅;表12个;参183篇。