目的:本课题旨在分析光滑假丝酵母菌转录因子Pdr1 C端3x FLAG修饰后pdr1基因表达和蛋白水平显著下降的原因,探究野生型Pdr1调控自身基因转录的程度,从而明确Pdr1 C端3x FLAG修饰后,降低的pdr1基因表达水平和蛋白水平是自激活减少所致;探究Pdr1 C端3x FLAG蛋白与转录共激活因子Gal11A的相互作用,从而明确Gal11A协同Pdr1激活pdr基因表达以及下游基因表达;最后明确泛素-蛋白酶体降解途径是否参与降低Pdr1 C端3x FLAG蛋白水平。为治疗光滑假丝酵母菌唑类耐药株提供新的药物治疗靶点。方法:第一部分,在配对唑类耐药菌株和唑类敏感菌株背景下构建Pdr1 N端3x FLAG、Pdr1 C端3x FLAG以及Pdr1 C端1x FLAG菌株,采用RT-q PCR、滴板实验、免疫荧光和免疫印迹实验验证菌株表型;第二部分,在野生型菌株背景下,构建pdr1基因启动子PDRE敲除株,通过RT-q PCR实验和滴板实验,明确Pdr1对自身基因表达的转录自调控;通过染色质免疫沉淀技术分析Pdr1 N端3x FLAG和Pdr1 C端3x FLAG结合下游基因以及自身启动子的差异,明确pdr1基因表达降低由于自激活减弱导致;第三部分,通过蛋白酶体抑制剂MG132比较Pdr1 N端3x FLAG和Pdr1 C端3x FLAG是否存在降解,通过放线菌酮比较两个蛋白的降解半衰期;通过蛋白免疫共沉淀技术比较Pdr1 N端3x FLAG和Pdr1 C端3x FLAG结合的泛素量的差异;最后分析在抑制蛋白酶体活性的情况下,Pdr1 C端3x FLAG入核功能、下游基因表达以及唑类耐药性是否有所恢复。结果:第一部分,我们验证了表型:Pdr1 C端3x FLAG蛋白水平和基因表达水平显著降低,而Pdr1 N端3x FLAG以及Pdr1 C端1x FLAG蛋白水平正常;Pdr1 C端3x FLAG菌株唑类耐药性显著降低,下游基因表达下降;Pdr1C端3x FLAG蛋白不入核。基于第一部分结果,我们首先验证pdr1基因启动子PDRE敲除株的表型,PDRE敲除株唑类耐药性显著降低,pdr1,cdr1和pup1基因表达显著降低,证明pdr1基因表达中有一半m RNA水平来源于自调控,提示Pdr1降低的蛋白水平和不入核很有可能导致结合自身启动子减少;接着我们通过免疫染色质共沉淀技术明确,和Pdr1 N端3x FLAG蛋白相比,Pdr1 C端3x FLAG结合自身启动子减少,结合下游基因也减少。因此,降低的pdr1基因表达很有可能是由于Pdr1 C端3x FLAG结合自身启动子减少导致的;通过分析Gal11A敲除或不敲除对Pdr1 C端3x FLAG激活自身m RNA表达,我们发现Gal11A对Pdr1 C端3x FLAG不存在转录共激活的作用,另外Pdr1 C端3x FLAG能过度富集Gal11A,提示Pdr1 C端修饰3x FLAG引起其C端结构以及功能的异常。最后一部分,由于Pdr1 C端修饰后其C端结构功能异常,我们怀疑这种结构异常是否引起了细胞内UPR（unfolded protein response）,基于这种推测,我们抑制蛋白酶体活性发现,Pdr1 C端3x FLAG的蛋白水平确实有所上升（2-3倍）;另外,和Pdr1 N端3x FLAG蛋白相比,Pdr1 C端3x FLAG能结合更多的泛素。证明Pdr1 C端3x FLAG确实存在泛素-蛋白酶体途径的降解。结论:光滑假丝酵母菌Pdr1 C端用大片断修饰（3x FLAG）能引起其蛋白和m RNA水平的降低,进一步研究发现Pdr1 C端,即激活域对其激活自身基因表达具有重要意义,而修饰其激活域能引起pdr1基因和蛋白表达降低,并导致一定程度的泛素-蛋白酶体途径降解。本研究提出转录因子Pdr1 C端可作为临床治疗光滑假丝酵母菌唑类耐药株的潜在靶点。