产脂肪酶抑制剂菌株的筛选、鉴定及活性物质的研究

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肥胖主要是由于患者体内脂肪积累过多导致,由于脂肪酶抑制剂能抑制脂肪酶活性的发挥,从而使脂肪在消化道的水解受阻,而排出体外达到减肥的效果。本论文主要从产脂肪酶抑制剂菌株的筛选及产物的分离纯化等方面进行研究。首先对构建筛选产脂肪酶抑制剂产生菌的模型进行研究,通过选择中性红为指示剂和打孔技术,利用显色透明这一平板特征来筛选产脂肪酶抑制剂的菌株。整个模型由平板显色法初筛和改进铜皂法复筛组成,同时改进铜皂法也可以单独作为一个部分用来测定不同脂肪酶的酶活。后对筛得的产脂肪酶抑制剂抑制率为25.32%的菌株进行鉴定,鉴定结果为Streptomyces sp.strain。其次是对脂肪酶这一困扰脂肪酶研究者的难题进行了研究,比较了脂肪酶酶活测定的滴定法和改进铜皂法这两种方法、步骤以及各自的优缺点。并选择改进铜皂法作为后续实验的测定方法。再次,对产脂肪酶抑制剂菌株Streptomycessp.strain的培养基成分及发酵条件进行优化,使得菌株Streptomycessp.strain产脂肪酶抑制剂的抑制率较优化前提高了 54.70%。最后,将发酵液通过预处理,活性物质性质的初步分析。通过HPLC、G-15葡聚糖凝胶柱层析、蛋白纯化系统进行分离纯化,再通过糖类、氨基酸、蛋白质的定性分析,结合质谱和酶标仪扫描,最后初步确定物质分子量为960.5的生物活性小分子多肽类。
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