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松子是经过两年的生长周期、蕴含丰富营养元素的物质,主要含有油脂、蛋白质和维生素,另外还含有糖类、矿物质、氨基酸和多种微量元素等。松子的蛋白质含量为47.69%,富含人体所需的8种必需氨基酸,是营养均衡的蛋白质来源,能被人体吸收利用。当今社会高血压是一种常见的高发病,是导致中风、心脏病、冠心病等疾病的诱导因子,现在已经成为全世界关注的健康问题。研究指出,血管紧张素转移酶(Agiotensin Converting Enzyme,ACE)抑制肽在肾素一血管紧张素系统和激肽原系统中,通过降低ACE酶活性,从而阻碍血压上升的途径,起到降血压的作用。近年来,因为食源性ACE抑制肽的无毒副作用、安全性高和成本低等特性,所以生物活性降血压肽的研究成为热点。试验根据Osborne法和碱溶酸沉法从松子蛋白组分中提取清蛋白、球蛋白、谷蛋白和分离蛋白,其纯度分别为48.02%、81.93%、83.02%和89.69%。氨基酸分析显示四种蛋白中必需氨基酸占总氨基酸的百分比分别是31.13%,34.22%,30.30%和34.54%。四种蛋白质都包含人体需要的8种必需氨基酸,分离蛋白中必需氨基酸含量高于其他三种蛋白质。研究表明,清蛋白暴露巯基和总巯基含量最高,分离蛋白次之,谷蛋白含量最低。分离蛋白中二硫键含量最高为28.74μmol/g,谷蛋白的含量最低为13.46μmol/g。溶解性最高的是球蛋白,在p H5.0等电点时四种蛋白质溶解性均最低。谷蛋白持水、持油性最大为2.06mL/g和3.98mL/g,持水性最小的是分离蛋白0.59mL/g,持油性最小的是清蛋白2.11mL/g。蛋白质的乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性随着蛋白质的浓度增加而增加,且均在pH5.0时最低。SDS-PAGE结果显示各蛋白组分具有不同的分子量。在此基础上以长白山松子分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶水解,以水解度和酶解物的ACE抑制率为考察指标,在单因素的试验基础上,通过响应面(BoxBenhnken)29个组合优化试验,确定ACE抑制率最佳条件为酶解pH8.9,酶解温度55℃,加酶量7500U/g(以底物计),底物浓度2.5%,此时ACE抑制率为70.1%,水解度为17.5%,与模型预测值基本相符。对松子蛋白Alcalase酶解物进行超滤分离,选取截流膜3kDa和10kDa的2个分子量,得到3个分离组分。分别考察3个组分的ACE抑制率,结果表明,A2即3kDa-10kDa的ACE抑制率最高为74.8%。通过Sephadex G-25对A2进行纯化,凝胶过滤色谱将其分为三个组分,其中B3的ACE抑制率最高为79.8%。对ACE抑制率最高组分进行Sephadex G-15进一步纯化,纯化后得到的组分C2测定ACE抑制率达到93.1%。反向高相液相对C2进行分离纯化后得到单一纯品。质谱鉴定得出松子降血压ACE抑制肽的分子量为296.16 Da和328.15 Da,氨基酸序列手动测算为Tyr-Leu和Tyr-Phe。研究出的两种物质其分子量不同,氨基酸序列不同,可能导致的降血压的功效及作用方式不同,需要我们今后进行研究与探讨。本研究旨在开发长白山松子蛋白资源和分析松子降血压肽结构性质,提高松子的食用价值和经济价值。为今后研究松子提供理论依据和科学凭证。