大肠埃希氏菌(Escherichia coli)和肠球菌(Enterococcus)是人和动物肠道共生菌,可以作为社区和农场中各种细菌耐药性发生情况的指标菌,而藏猪原产于西藏地区,在藏区普遍将藏猪放养于自然环境中,自由觅食,从不用药。对藏猪源大肠杆菌和肠球菌开展耐药性调查及其耐药机制研究,在兽医及人医领域均有重要的公共卫生意义。试验菌株分离自2012年从西藏林芝市觉木沟附近山林采集的232份新鲜藏猪粪便样本,该地区藏猪采用放牧式养殖方式,管理十分粗放,调查未发现使用抗生素和抗菌促生长剂。经选择性培养、生化鉴定和16S rDNA PCR确证,共分离出129株大肠杆菌和84株肠球菌,分离率分别为55.6%和36.2%,其中屎肠球菌45株占肠球菌的53.57%、粪肠球菌31株占36.90%、希拉肠球菌5株占5.95%、蒙氏肠球菌3株占3.57%,首次分离到猪源蒙氏肠球菌。使用纸片扩散法、微量肉汤稀释法对分离的大肠杆菌进行11种常用抗菌药物敏感性试验,结果显示,受试大肠杆菌表现出对四环索(40.4%)较高水平的耐药率,对氟苯尼考(27.9%)、氨苄西林(27.9%)、萘啶酸(19.4%)、复方新诺明(19.4%)、链霉素(16.3%)和头孢噻呋(10.9%)表现中等水平耐药,对环丙沙星、庆大霉素和大观霉素的耐药率则比较低,未发现阿莫西林/克拉维酸耐药大肠杆菌菌株。有32株大肠杆菌对三类以上的抗菌药物同时表现出耐药性,多重耐药率为24.8%。使用纸片扩散法、微量肉汤稀释法和琼脂稀释法测定对分离的肠球菌进行13种常用抗菌药物敏感性试验,结果显示,受试肠球菌对苯唑西林(92.8%)、克林霉素(82.1%)和红霉素(48.8%)表现出高水平耐药,这与肠球菌的固有耐药有关,肠球菌对四环素(64.3%)表现出较高水平的耐药率,对氟苯尼考(17.9%)表现中等水平耐药,对青霉素(6.0%)和环丙沙星(3.6%)的耐药率则比较低,对氨苄西林、左旋氧氟沙星、氨基糖苷类药物的耐药率很低,未发现对阿莫西林／克拉维酸或万古霉素耐药肠球菌菌株,统计发现,除四环素、红霉素和青霉素外,四种肠球菌对其他药物耐药性无显著性差异。通过PCR方法对所有分离的菌株进行耐药基因检测,结果显示,大肠杆菌中携带blaTEM11株(8.5%)、blacTx-M11株(8.5%)、qnrB1株(0.8%)、qnrD9株(7%)、qnrS7株(5.4%)、floR31株(24.0%)、cfr-3株(2.3%),未检出blaSHV、CMY-1、CMY-2、blaOXA-2、blaOXA-10、 gnrA、gnrC、gepA、aac(6’)-Ib、oqxA和oqxB耐药基因,发现β-内酰胺酶基因与PMQR基因的连锁流行；肠球菌中携带fexA12株(14-3%)、fexB2株(2.4%)、cfr3株(3.6%),有两株氟苯尼考耐药菌株未检出cfr、fexA和fexB；测序结果显示检出的blaTEM全部为TEM-1,检出的blacrx-M有8株为CTX-M-14、3株为CTX-M-15,qnrS全部为gnrSl。应用脉冲场凝胶电泳分型技术对携带耐药基因的大肠杆菌和对氟苯尼考耐药肠球菌进行研究,结果显示,β-内酰胺酶基因阳性大肠杆菌、PMQR基因阳性大肠杆菌和floR基因阳性大肠杆菌中存在克隆现象,氟苯尼考肠球菌耐药菌种的同源性较低,未发现克隆传播,提示p-内酰胺类药物、喹诺酮类药物和氟苯尼考的耐药性在藏区藏猪源大肠杆菌中存在垂直传播,大部分氟苯尼考耐药基因则是通过水平转移的途径在藏区藏猪源肠球菌中传播。综上所述,藏猪源细菌除四环素外,对其他常见抗菌药物敏感性较好,耐药基因的检出率较国内其他养殖业发达地区都低。但是大部分耐药基因都是通过水平转移的途径在藏猪源细菌中传播,提示相关部门要继续严格控制抗菌药物在藏猪养殖过程中的使用,另外要限制藏猪活动空间,加强饲养管理,避免人员和其他动物随意进入的可能。