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白细胞介素-12(IL-12)是一种具有异二聚体结构的抗肿瘤细胞因子,能够通过诱导细胞免疫反应、增强体液免疫、抑制血管生成等多种途径发挥强抑瘤作用。但是,IL-12一直受到局部表达浓度低、时间短、疗效差、系统毒性强等问题的阻碍,难以推广于临床。慢病毒载体是目前最具潜力的基因治疗载体,其免疫原性低、表达时间长。皮瓣是整形外科领域理想的靶向基因传递系统,具有靶向性强、全身毒性低、操作可逆等优点。重组白介素12慢病毒载体感染皮瓣有望解决以往白介素12系统毒性强、局部浓度低、治疗效果差的问题,充分发挥白介素12的抑瘤作用。本研究旨在构建重组白介素12慢病毒,研究增强感染皮瓣主要细胞感染率的方法以及感染率与感染时间的关系,以期应用于体外抗肿瘤研究。实验以pORF-mIL-12为模板,PCR调取目的基因,与表达载体重组,采用三质粒慢病毒包装系统成功构建重组白介素12慢病毒(LV-mIL-12)。LV-mIL-12感染人及大鼠成纤维细胞(HDF、RDF)、血管内皮细胞(HUVEC、RAEC)后,通过RT-PCR、Western Blot、ELISA等方法检测mIL-12过表达。通过ELISA方法检测过表达mIL-12能够诱导脾细胞生成INF-γ,证实其具有生物活性。另外,我们在体外利用多种增强剂提高慢病毒感染率。研究结果显示：polybrene能够较好的增强慢病毒感染RAEC和RDF的感染效率,而polybrene-ENi.S能较好的提高慢病毒感染(?)HUVEC和HDF的感染效率。另外,在感染复数(MOI)为200的条件下,对于人及大鼠皮瓣主要细胞,分别感染3小时和6小时即可达到较好的感染效果(感染率超过50%)。