论文部分内容阅读
目的:筛选对巴豆生物碱(croton alkaloid, CA)敏感的消化系统肿瘤细胞,并观察CA对敏感肿瘤细胞人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法:用不同浓度CA分别处理人胃癌SGC-7901细胞、人胰腺癌PANC-1细胞、人结肠癌SW480细胞,24、48、72小时后,CCK-8法检测CA对各类细胞的增殖抑制情况,hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法检测增殖、凋亡相关调控蛋白PCNA、Ki-67和Bax、Fas的表达情况。结果:1.CA对PANC-1细胞、SW480细胞增殖抑制的影响不规律、不稳定,对人胃癌SGC-7901细胞有显著的增殖抑制作用,其抑制率与作用浓度及时间相关。随着CA浓度的升高,24、48、72小时细胞增殖活性与对照组相比,分别从97.6%、94.6%、74.9%下降到86.3%、40.4%、18.1%(p<0.05)。CA对人胃癌SGC-7901细胞作用72小时的IC50约为94.86ug/ml。根据IC5o取100ug/ml浓度点,对人胃癌SGC-7901细胞分别处理24、36、48、60、72小时,细胞活性与对照组相比,从82.08%下降到10.34%。24、36小时时,p<0.05:48、60、72小时时,p<0.01。2.hoechst染色后荧光显微镜下观察到人胃癌SGC-7901细胞呈凋亡的形态学改变,部分细胞体积变小,细胞膜皱缩,形态不规则,细胞核形态发生明显改变,细胞核内可见浓染致密的蓝色颗粒荧光,呈现核固缩、核碎裂等改变,并伴随凋亡小体形成。随着作用时间的延长,细胞凋亡率与对照组相比,CA组从5.56%升高到45%,5-氟尿嘧啶组从5.88%升高到50%(P<0.05)。3.流式AV/PI双染法检测到人胃癌SGC-7901细胞早期及晚期凋亡。随着CA浓度增高,与对照组相比,细胞凋亡率由13.46%升至40.83%,其中早期凋亡率及晚期凋亡率分别由9.82%、3.46%升至34.92%、4.55%(P<0.05)。4.免疫组化显示:人胃癌SGC-7901细胞中增殖相关核抗原PCNA、Ki-67的表达阳性率随着CA浓度的增加,分别由12.3%、23.8%降至1.7%和4.9%(p<0.05);凋亡相关调控蛋白Bax和Fas表达阳性率随着CA浓度增加,分别由3.9%、13.3%升至56.7%和65.3%(p<0.05)。结论:1.CA碱对人胰腺癌PANC-1细胞、人结肠癌SW480细胞没有明显的抑制诱导作用。2.CA能显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,并呈量效和时效关系,其作用机制可能与其下调PCNA和Ki-67蛋白表达相关。3.CA能显著诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡,呈时间和剂量依赖性,上调Bax和Fas蛋白表达可能是其作用机制之一。