研究目的:　　本课题运用生物信息学方法筛选出胰腺癌中高表达的长链非编码RNA，即MALAT-1，研究其在胰腺癌中表达情况;分析MALAT-1表达与胰腺癌临床病理特征之间的关系;阐明MALAT-1在胰腺癌中的生物学功能及调控的分子机制。　　研究内容和方法:　　1.通过分析NCBI GEO公共数据库中胰腺癌表达谱芯片数据，筛选出长链非编码RNA MALAT-1在胰腺癌中高表达，并在胰腺癌细胞及组织中进行验证，同时分析MALAT-1表达与临床病理特征之间的关系。　　2.研究MALAT-1在胰腺癌中的生物学功能。构建稳定干扰MALAT-1的细胞系，分别在分子、细胞以及模式动物水平研究其对胰腺癌生物学功能的影响，包括肿瘤细胞增殖、细胞周期和凋亡、体外细胞迁移和侵袭，体内裸鼠移植瘤生长等，并利用蛋白印迹等方法检测与肿瘤侵袭转移、细胞增殖等密切相关的蛋白表达情况，寻找MALAT-1可能介导的信号通路。　　3.探讨MALAT-1影响胰腺癌细胞干性特征。流式细胞仪检测干细胞标记物的表达，通过软琼脂平板克隆及无血清肿瘤悬浮球培养、体外促血管新生、耐药能力等实验研究MALAT-1对胰腺癌干细胞样特征的影响，利用蛋白印迹等方法检测胰腺癌自我更新相关分子标记的表达。　　4.分析MALAT-1促进胰腺癌迁移和侵袭可能的分子机制。利用RNA结合蛋白免疫沉淀、染色质免疫共沉淀、免疫组化等实验研究MALAT-1结合PRC2复合体，协同转录抑制靶基因表达的机制。　　研究结果:　　1.Real time PCR结果验证胰腺癌细胞系及组织标本中MALAT-1表达上调;统计分析胰腺癌石蜡组织样本中MALAT-1表达与临床病理特征之间的关系，结果发现:MALAT-1高表达与胰腺癌AJCC临床分期（进展期）、淋巴结转移（发生转移）以及神经浸润（有浸润）呈正相关。　　2.下调MALAT-1表达可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，可能的机制包括诱导G2/M细胞周期阻滞、促进凋亡、抑制上皮向间质转化及基质金属蛋白酶家族成员-1、2、9表达等。　　3.MALAT-1可能发挥竞争性内源RNA的功能，通过上调Sox2的表达增强胰腺癌干细胞样特征，包括软琼脂平板克隆及无血清肿瘤悬浮球能力、肿瘤血管生成能力等增加，而吉西他滨药物敏感性下降。　　4.PRC2复合体家族成员EZH2促进胰腺癌细胞迁移和侵袭，但不影响细胞增殖、凋亡和周期改变。免疫组织化学染色结果显示:EZH2、E-cadherin表达与胰腺癌患者的淋巴结转移、AJCC临床分期密切相关，两者之间表达呈负相关。EZH2可转录抑制E-cadherin表达。经Cox回归模型多因素分析发现，EZH2表达可作为判定胰腺癌患者预后的独立因素之一。RNA结合蛋白免疫沉淀、染色质免疫共沉淀等实验证实MALAT-1可通过招募结合EZH2，协同转录抑制E-cadherin，进而促进胰腺癌的侵袭和迁移。　　研究结论:　　高表达长链非编码RNA MALAT-1可显著促进胰腺癌细胞恶性表型，包括增强胰腺癌细胞干性特征，促进细胞增殖、迁移和侵袭能力等。提示，MALAT-1可作为胰腺癌临床治疗的一个有效分子靶点。