【摘 要】
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芝田硫化叶菌(Sulfolobus shibatae)是一种极端嗜热古菌,其所携带的温和病毒SSV1是研究古菌DNA复制的一个非常合适的系统.杂交分析表明,静置培养时,芝田硫化叶菌细胞内几乎检
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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芝田硫化叶菌(Sulfolobus shibatae)是一种极端嗜热古菌,其所携带的温和病毒SSV1是研究古菌DNA复制的一个非常合适的系统.杂交分析表明,静置培养时,芝田硫化叶菌细胞内几乎检测不到游离SSV1 DNA,病毒DNA主要以整合状态存在.但经紫外或丝裂霉素诱导后,细胞内游离SSV1 DNA含量明显增加,整合SSV1 DNA拷贝数不变.丝裂霉素诱导效果明显优于紫外诱导.丝裂霉素诱导后摇动培养,诱导效果加强.据此,建立了稳定高效的SSV1 DNA丝裂酶素诱导复制方法.采用此法,芝田硫化叶菌细胞内游离SSV1 DNA含量在诱导后10h开始明显增加,并在12-15h达到最大值,此时细胞内SSV1 DNA含量占细胞总DNA含量的10﹪,约为50个拷贝/细胞.诱导后12小时左右可在细胞内获得SSV1 DNA复制中间体.此后,细胞内的游离SSV1 DNA含量开始减少,60小时后细胞内游离的SSV1 DNA拷贝数减至对照水平,但诱导后60小时内芝田硫化叶菌细胞生长正常.诱导后伴随着SSV1 DNA复制,成熟SSV1病毒向细胞外释放.
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