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目的:流行病学提示子宫内膜癌患者体内的雄激素浓度普遍高于健康对照人群,但其体内高浓度的雄激素的具体作用尚不明确。通过高浓度的雄激素(100n M DHT)刺激子宫内膜癌细胞,观察其对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响,同时深入探究高浓度雄激素在子宫内膜癌中的作用机制。丰富EC的发生机制,为开辟子宫内膜癌的个体化靶向治疗及激素治疗提供理论基础和数据支持。材料与方法:本课题分2个部分进行实验研究:1、体外实验研究雄激素对子宫内膜癌细胞恶性进展的影响(1)采用Transwell实验探索高浓度雄激素对子宫内膜癌细胞迁移侵袭的影响;(2)借助Western Blot分析高浓度雄激素对上皮间质转化过程中的标志物Ecadherin、N-cadherin和Vimentin等蛋白的影响;(3)利用蛋白免疫共沉淀实验和免疫荧光分析高浓度雄激素对E-cadherin和β-catenin结合能力的影响。同时,利用免疫荧光实验观察高浓度雄激素对子宫内膜癌细胞骨架蛋白(F-actin)的影响;(4)针对课题选择预测的功能信号通路WNT/β-catenin,分别提取细胞总蛋白、胞浆、胞核及胞膜蛋白,Western Blot分析该通路中关键蛋白GSK3β、pGSK3β、β-catenin和p-β-catenin(Ser675)的表达情况。2、体内实验证实雄激素对肿瘤发生发展的影响构建子宫内膜癌尾静脉转移瘤动物模型,将裸鼠随机分为实验组和对照组,实验组每只裸鼠给予7mg/kg的DHT,对照组给予等剂量的生理盐水,每周3次,一共4周。利用小动物成像系统观察DHT对肿瘤转移能力的影响。结果:1.在Transwell实验中,高浓度的雄激素(100n M DHT)可显著抑制子宫内膜癌细胞(KLE和HEC-1B)迁移(实验组vs对照组:KLE 18.00±4.506 vs52.00±3.362;HEC-1B 58.13±2.524 vs 85.63±4.660,P<0.05)和侵袭过程(实验组vs对照组:KLE 19.80±2.672 vs 43.20±2.939;HEC-1B 39.60±3.219 vs 65.40±5.845,P<0.05)。2.在KLE细胞中,高浓度的雄激素(100n M DHT)可显著促进上皮细胞标志物E-cadherin蛋白的表达,抑制间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。在HEC-1B细胞中,高浓度的雄激素(100n M DHT)作用后Ecadherin表达变化不明显,但间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin蛋白的表达明显降低。且F-actin染色显示高浓度的雄激素(100n M DHT)减少了癌细胞(KLE和HEC-1B)片状伪足的形成。3.蛋白质免疫共沉淀实验结果显示高浓度的雄激素(100n M DHT)作用后,E-cadherin与β-catenin蛋白的结合能力明显增强;免疫荧光实验结果也表明高浓度的雄激素(100n M DHT)作用后,E-cadherin与β-catenin在细胞膜处的共定位荧光明显增多。4.在KLE和HEC-1B细胞中,DHT作用后细胞中总β-catenin/p-β-catenin(Ser675)及胞核中β-catenin/p-β-catenin(Ser675)的表达明显降低,但细胞膜中的β-catenin表达明显升高;WNT通路的负性调控因子GSK3β表达明显升高。5.生物发光成像检测小鼠肺部转移肿瘤生长情况发现:高浓度的雄激素处理后裸鼠子宫内膜癌转移瘤的生长速度要小于对照处理组,但二者无明显统计学差异。结论:1高浓度雄激素可明显抑制子宫内膜癌细胞迁移侵袭,抑制EMT过程及癌细胞伪足的形成。2高浓度雄激素通过激活GSK3β的活性而抑制β-catenin入核,同时促进β-catenin向胞膜侧移动,增加了细胞间粘附链接复合体E-cadherin/β-catenin的稳定性。3高浓度雄激素减弱裸鼠转移瘤模型子宫内膜癌转移。