论文部分内容阅读
目的:分别构建嗜酸粒细胞哮喘小鼠和非嗜酸粒细胞哮喘小鼠模型,干预嗜酸粒细胞哮喘肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)信号以及非嗜酸粒细胞性哮喘小鼠芳香烃受体观察其对哮喘气道炎症的影响并初步探讨其机制。方法:(1)OVA致敏和激发的方法构建哮喘小鼠模型,Real-time和western blot的方法检测TNFR2 mRNA和蛋白的表达。(2)TNFR2中和性抗体滴鼻抑制TNFR2信号,肺组织病理,肺泡灌洗液计数,ELISA检测血清、BALF上清中炎症因子水平观察其对气道炎症的影响。流式的方法检测体内及体外培养中TNFR2信号抑制对CD4~+T细胞分化的影响。Western bolt的方法检测各辅助性T细胞相关转录因子Tbet,GATA3,FoxP3和RORγ的表达。(3)TNF-α腹腔注射及TNFR1中和性抗体滴鼻的方法激活TNFR2信号,肺组织病理,肺泡灌洗液计数,ELISA检测血清、BALF上清中炎症因子水平观察其对气道炎症的影响。流式的方法检测体内及体外培养中TNFR2信号抑制对CD4+T细胞分化的影响。Western bolt的方法检测各辅助性T细胞相关转录因子Tbet,GATA3,FoxP3和RORγ的表达。(4)OVA+LPS致敏,OVA激发的方法构建非嗜酸粒细胞性哮喘模型,TCDD灌胃激活芳香烃受体。(5)肺组织病理,肺泡灌洗液计数,ELISA检测血清、BALF上清中炎症因子水平,免疫组化检测中性粒细胞髓过氧化物酶和Gr-1的表达观察其对气道炎症的影响。流式的方法检测Treg和Th17细胞的分化,western blot的方法检测FoxP3,RORγ的表达。(6)分选肺组织树突状细胞观察其对树突状细胞CD80,CD86表达的影响。结果:(1)在嗜酸粒细胞性哮喘组中TNFR2 mRNA以及蛋白的表达较对照组降低。(2)TNFR2信号抑制加重了哮喘气道炎症并促进了血清、BALF上清中IL-4,IL-5,IL-17,TNF-α的表达,抑制了IFN-γ和IL-10的表达。TNFR2信号抑制促进了Th2,Th17在体内及体外的分化,并促进了其转录因子GATA3,RORγ蛋白的表达。同时抑制了Th1,Treg在体内的分化,及其转录因子Tbet和FoxP3蛋白的表达。(3)TNFR2信号激活减轻了哮喘气道炎症并抑制了血清、BALF上清中IL-4,IL-5,IL-17的表达,同时促进了IFN-γ和IL-10的表达。TNFR2信号激活抑制了Th2,Th17在体内及体外的分化,并抑制了其转录因子GATA3,RORγ蛋白的表达。同时促进了Th1,Treg在体内的分化,及其转录因子Tbet和FoxP3蛋白的表达。(4)芳香烃受体激活减轻了非嗜酸粒细胞哮喘小鼠的气道炎症,抑制了血清,BALF上清中IL-17,IL-4的表达,但促进了IL-10的表达。芳香烃受体激活促进了Treg细胞的分化以及FoxP3蛋白的表达,但抑制了Th17细胞的分化以及RORγ蛋白的表达。(5)芳香烃受体激活对非嗜酸粒细胞哮喘小鼠DC细胞的成熟无影响。结论:TNFR2信号激活减轻气道炎症,其机制可能与调节CD4~+T淋巴细胞的分化有关。芳香烃受激活改善了非嗜酸粒细胞性哮喘气道炎症其机制可能与促进Treg细胞分化,抑制Th17细胞分化有关,而与改善DC细胞成熟度无关。