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目的通过建立高脂血症大鼠模型,采用ELISA与16SrRNA高通量测序技术,观察化痰活血方对高脂血症大鼠模型肠道通透性及肠道菌群的影响,探讨化痰活血方降血脂的作用机制。方法48只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组(Normal control group,NC,n=8)和高脂饮食组(High fat diet,HFD,n=40)。NC组予以普通饲料,高脂饮食组予以高脂饲料。喂养4周后,NC组随机选取5只大鼠,HFD组随机选取8只大鼠,禁食12小时,眼眶取血,分离血清,检测血脂四项(TC、TG、HCL-C、LDL-C)水平,验证高脂血症模型建立成功后,将高脂饮食组随机分为5组,即高脂模型组(MD组,n=8)、立普妥对照治疗组(LPT组,n=8)、化痰活血方高剂量组(HG组,n=8)、化痰活血方中剂量组(HZ组,n=8)、化痰活血方低剂量组(HD组,n=8),并继续予以高脂饮食,同时灌胃给予:LPT组0.1800 mg·ml-1·d-1立普妥,HG组2.7900g·ml-1·d-1化痰活血方,HZ组1.3950g·ml-1 ·d-1化痰活血方,HD组0.6975 g·m1-·d-1化痰活血方,NC组与MD组均给予等体积的蒸馏水,共给药4周。实验第8周末,处死各组大鼠,留取血样、肝脏组织、结肠组织、大鼠粪便。测量肝湿重,计算肝指数;采用全自动生化分析仪检测:血脂四项,包括总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(ligh-density lipoprotein,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein,HDL-C);肝功能指标,谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)。采用油红O染色(oil red staining,ORO)和苏木素-伊红(Hematoxylin&eosin,HE)染色观察肝脏组织病理变化;采用HE染色观察结肠组织病理变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肠道通透性指标:血清D-乳酸(D-lactic Acid,DLA)水平、血清二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性。基于Illumina Miseq平台,采用16S rRNA高通量测序技术观察大鼠肠道菌群结构的变化结果1.与NC组比较:MD组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平均显著升高(均P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);血清AST、ALT水平显著升高(均P<0.01);肝指数显著升高(P<0.05);肝脏HE及油红染色提示:MD组存在肝脏细胞脂肪变性及炎症浸润情况。2.与NC组比较:MD组血清DLA水平及血清DAO活性程度显著升高(均P<0.05),提示肠粘膜受损,肠道通透性增加;结肠HE染色结果显示:MD组黏膜结构连续性受损,肠道淋巴组织增生,提示存在慢性炎症。3.与NC组比较:MD组的肠道菌群物种多样性及物种丰度显著降低,肠道菌群结构呈现:厚壁菌门与拟杆菌门的比值增高,肠道致病菌如疣微菌门(Verrucomicrobia,接近于统计学差异P=0.083),变形菌门(Proteobacteria),布劳特氏菌属(Blautia,梭菌科,P<0.05),瘤胃球菌属(Ruminococcus,P<0.05),Romboutsia等丰度升高;肠道有益菌如拟杆菌门(Bacteroidetes)、柔膜菌门(Tenericutes,P<0.05)、放线菌门(Actinobacteria)、毛螺菌属(Lachnospiraceae,P<0.05),拟杆菌科 S24-7 组(Bacteroidales_S24-7_group),乳杆菌属(Lactobacillus)等丰度降低。4.与MD组比较:化痰活血方高、中、低剂量组血清TC、TG、LDL-C水平均显著降低(P<0.05-0.01),HDL-C水平均显著性升高(均P<0.01),且降TG效果均优于LPT组;化痰活血方高、中、低剂量组血清AST、ALT水平均显著降低(为P<0.05-0.01),且降AST效果优于LPT组。化痰活血方高、中、低剂量组肝湿重及肝指数均显著性降低(P<0.05-0.01);肝脏HE及油红染色结果显示:化痰活血方高、中、低剂量组肝细胞脂肪变性及炎细胞浸润情况均有所改善。说明化痰活血方能够降低高脂血症大鼠模型的血脂水平,改善肝功能,减少肝脏脂肪沉积与脂肪变性,保护肝脏。5.与MD组比较:化痰活血方高、中、低剂量组血清DAO活性、血清DLA水平均显著降低(均P<0.01);结肠HE染色结果显示:化痰活血方高、中、低剂量组的组织结构较清晰,可见黏膜层、黏膜下层腺体有序排列,肌层及外膜较完整,提示用药组的肠道通透性情况有明显改善。说明化痰活血方可以修复高脂血症引起的肠粘膜损伤,降低肠道通透性,保护肠粘膜。6.与MD组比较:化痰活血方高、中、低剂量组肠道菌群的物种多样性及物种丰度均显著性增加,厚壁菌门与拟杆菌门比值降低,肠道条件致病菌下降,而有益菌增多,具体表现为:疣微菌门(Errucomicrobia,P<0.05)、变形菌门(Proteobacteria,P<0.05)、脱铁杆菌门(Deferribacteres)、布劳特氏菌属(Blautia,梭菌科,P<0.05)等有害菌丰度降低,而拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、柔膜菌门(Tenericutes,P<0.05)、乳杆菌属(Lactobacillus)、罗斯氏菌属(Roseburia,P<0.05)、毛螺旋菌科NK4A136组(Lachnospiraceae_NK4A136_group,P<0.05)、拟杆菌科S24-7组(Bacteroidales_S24-7_group)等肠道有益菌丰度升高。说明化痰活血方能够增加肠道菌群的物种多样性及物种丰度,富集有益菌群,抑制条件致病菌,优化高脂饮食破坏的肠道菌群结构。结论1.化痰活血方可以降低高脂血症大鼠模型的血脂水平,改善肝功能,减少肝脏脂肪沉积与脂肪变性,保护肝脏,修复高脂血症引起的肠粘膜损伤,降低肠道通透性,保护肠粘膜,增加肠道菌群的物种多样性及物种丰度,富集有益菌群,优化肠道菌群结构。2.化痰活血方调节机体脂质代谢的作用机制,与修复肠粘膜屏障、改善肠道通透性、优化肠道菌群结构有关。