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甲状旁腺激素(PTH)是机体内调节钙、磷代谢的重要激素,定量检测甲状旁腺激素在辅助诊断甲状旁腺功能亢进与减退、高钙血症、低钙血症、慢性肾衰竭和肾性骨病以及疾病的治疗监测中发挥重要作用。本论文主要进行了甲状旁腺激素定量检测试剂盒(磁微粒化学发光法)的开发和性能评价,开发完成的检测试剂盒性能良好,可用于人血清或血浆样本中甲状旁腺激素的定量检测。研究方法和结果：1.主要原材料研究：用全长的重组人甲状旁腺激素抗原免疫小鼠,制备出36株抗人甲状旁腺激素的单克隆抗体,通过片段鉴定的方法确定了36株抗体分别针对的位点,挑选出4株针对PTH(1-34)的单抗和5株针对PTH(39-84)较好的单抗,筛选出最优的1对抗体作为试剂盒开发的原材料,并确定了原材料的质量标准。2.试剂盒组份的制备工艺研究：磁微粒混悬液包被方法为羧基两步法,包被浓度为0.3μg/T,活化时间和包被时间分别为0.5小时和2小时；酶结合物的配方为pH7.40.05M Tris稀释液中加入1%浓度的牛血清白蛋白,酶结合物的工作浓度为1/500-1/750之间；校准品的配方为pH7.40.05M Tris缓冲液中加入1%的牛血清白蛋白和1%的EDTA,校准品的量值溯源至国际参考品WHO 95/646。3.试剂盒的反应体系研究：试剂盒可以使用的样本为血清或血浆,推荐使用EDTA抗凝血浆。样本中添加20mg/dl的胆红素、200mg/dl的血红蛋白和3000mg/dl的甘油三酯对测定结果的影响小于10%；样本加样量确定为50μ1,反应时间确定为30分钟,信号测量时间为底物加入后1分钟到13分钟任意时间；校准曲线的建立为发光值取对数后,采用四参数拟合方式建立校准曲线。4.试剂盒的分析性能研究：试剂盒的分析内变异、分析间变异和批间变异均不超过10%；测定1000ng/ml的骨钙素、500ng/ml的降钙素、500ng/ml的p-胶原序列、10000pg/ml的PTH(1-34)、10000pg/ml的PTH(39-84),检测结果均不超过2.0pg/ml;分析灵敏度测定值不超过2.0pg/ml,功能灵敏度结果为5.0pg/ml;检测500000pg/ml的PTH测定值不低于3000pg/ml;稀释回收率介于0.90-1.10之间,添加回收率在0.85-1.15之间。5.试剂盒的稳定性研究：考查了各组分的加速稳定性、整套试剂盒的加速稳定性、整套试剂盒模拟运输稳定性、实时稳定性和拆封稳定性。试剂盒组份和整套试剂盒放置37℃ 10天的加速稳定性均符合要求；成品试剂盒实时存放12个月,试剂盒性能无显著变化；拆封后可稳定使用28天；血清标本存放于室温24小时后降低12%,推荐样本在室温条件下存放不要超过12小时,2-8℃存放条件下不要超过48小时。6.参考区间的建立：检测148例健康人血清,以测定值的95%为界限,分别取2.5%和97.5%百分位数的数值作为参考区间的下限和上限,通过SPSS软件计算出参考值区间的下限和上限大约为11.0和81.0,参考区间设定为11.0-81.0pg/ml。7.临床研究：测定214例临床样本,结果显示考核试剂盒与对比试剂盒的阳性符合率为97.73%,阴性符合率为96.34%,总符合率为97.20%,两者无明显区别。两者检测数值呈高度相关,相关系数为0.9940,可以用于临床PTH含量的检测。结论：本论文建立了甲状旁腺激素定量检测试剂盒(磁微粒化学发光法),并评估了试剂盒的灵敏度、精密性、特异性、准确性、稳定性、建立了试剂盒的参考区间、开展了临床应用研究,与已上市的同类试剂盒平行比对,结果表明本试剂盒临床符合率高、检测准确性好、性能指标达到国际同类厂家水平,本试剂盒成本经济、质量可靠,将为临床实验室提供质优价廉的新选择。