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公猪睾丸的发育和功能是由下丘脑分泌的促性腺激素释放激素（Gonadotropin-releasing hormone,GnRH）调控的,GnRH与脑垂体内的特异性受体结合,引起促黄体激素（Luteinizing hormone,LH）与促卵泡激素（Follicle stimulating hormone,FSH）的合成、分泌及释放,而LH和FSH作用于睾丸,调控睾丸类固醇物质睾酮（Testosterone）和雄烯酮（Androsteone）的分泌。雄烯酮是导致猪肉膻味的物质之一,其在促黄体素的调控下由睾丸间质细胞产生,通过血液循环到达全身组织并进行累积。导致膻味的另一物质是粪臭素,是在大肠后段肠道厌氧微生物的作用下分解L-色氨酸产生,在公畜、母畜均可发生,主要代谢途径是肝脏代谢,肝代谢机制受睾酮的抑制作用。因此通过调控LH和FSH的分泌可以起到调控机体内雄烯酮及粪臭素含量的作用。因此,结合前人的经验,本研究制备了分别以GnRH单体、GnRH二聚体Ⅰ、GnRH二聚体Ⅱ以及GnRH并列二聚体去势肽为抗原的四种免疫去势疫苗,继疫苗质量检验合格后,先后分别进行了疫苗免疫对雄性SD大鼠及对公猪的免疫去势效果研究,显示出一定的去势效果,同时建立了检测GnRH抗体的间接ELISA方法,主要研究内容如下:1.GnRH合成肽去势疫苗的制备。分别以GnRH单体、GnRH二聚体Ⅰ、GnRH二聚体Ⅱ、GnRH并列二聚体四种去势肽为抗原,以MONTANIDETM ISA 61 VG作油佐剂,乳化制备GnRH疫苗。疫苗经检验,滴水实验不分散,镜检,显示乳化效果良好;无菌检验显示硫乙醇酸盐培养基、葡萄糖蛋白胨培养基的液体仍然为淡黄色、澄清透明状,没有污染杂菌。所制备的疫苗可以用于接下来的试验研究。2.大鼠血清GnRH抗体间接ELISA检测方法的建立。以GnRH肽为抗原包被酶标板,山羊抗大鼠辣根过氧化物酶作二抗,采用棋盘法筛选抗原、一抗及二抗的最佳稀释倍数,绘制标准曲线,通过特异性、重复性试验对建立的方法进行检验。结果显示,GnRH合成肽抗原的最佳包被浓度为1.28μg/m L,大鼠血清的最佳稀释度为1:51200,二抗的最佳稀释度为4000;阳性血清抗体浓度与OD值呈线性关系,方程y（28）.00515x（10）.01036,R~2=0.9976;检测用酶标板板内变异系数为0.78%至3.16%,板间变异系数为3.24%至7.79%,说明所建立的方法线性及重复性良好,可用于接下来的血清样品检测。3.GnRH合成肽疫苗对大鼠的免疫去势效果研究。选取54只9周龄大小的雄性SD大鼠,随机分为9组,1为空白对照组,2～9为疫苗免疫组:分别为GnRH单体单次免疫组、GnRH单体两次免疫组、GnRH二聚体Ⅰ单次免疫组、GnRH二聚体Ⅰ两次免疫组、GnRH二聚体Ⅱ单次免疫组、GnRH二聚体Ⅱ两次免疫组、GnRH并列二聚体单次免疫组、GnRH并列二聚体两次免疫组,首免时间为9周龄,加强免疫时间为11周龄,于免疫前及免疫后每两周采血一次,分离血清-20℃保存备用。间接ELISA方法检测大鼠血清GnRH抗体效价,采用碘[125I]睾酮放射免疫分析法检测血清中睾酮水平,测量大鼠体重变化,大鼠睾丸重,通过大鼠睾丸组织切片及H.E.染色观察组织结构的变化。结果显示:与空白对照组比较,疫苗免疫组大鼠血清中GnRH抗体效价显著升高（P＜0.01）;两次免疫的抗体滴度均高于单次免疫;直至免疫后43周,GnRH二聚体Ⅰ疫苗免疫组大鼠血清GnRH抗体效价仍然维持在2.5以上。免疫组血清睾酮含量极显著下降（P＜0.01）,GnRH二聚体及GnRH单体的两次免疫100%有效,GnRH二聚体起效时间早2周;免后30周时,体内睾酮开始恢复,两次免疫恢复程度小于单次免疫。免疫组大鼠睾丸重量均极显著低于空白对照组（P＜0.01）。试验期间空白对照组与免疫组之间体重差异不显著（P＞0.05）。同时组织染色结果显示,空白对照组大鼠睾丸组织结构完整,曲细精管内的精原细胞逐渐向管腔发育,明显分化。免疫组大鼠睾丸明显萎缩,曲细精管管径变小。得出GnRH合成肽疫苗均能产生免疫去势作用,GnRH二聚体去势起效更快,效果更稳定,并且持续时间能达到25周以上,作为初步筛选结果作进一步研究。4.GnRH合成肽疫苗对公猪的免疫去势效果研究。选取10周龄,健康、体重接近的公猪40只,随机分为4组,分别为:空白对照组、手术去势组、异普克疫苗免疫组（10、14周龄两次免疫）、GnRH二聚体Ⅰ免疫组（10、12周龄两次免疫）,于免疫前和免疫后每两周采血一次,分离血清检测血清中睾酮含量的变化。结果显示,免疫去势组公猪血清睾酮水平均在第6周时下降至手术去势组的血清睾酮水平,其中异普克免疫组维持时间为6周,之后出现恢复,GnRH二聚体Ⅰ免疫血清睾酮水平在14周时仍维持在手术去势水平,说明持久性更好一些。本研究将免疫技术与去势技术有结合进行免疫去势的研究,为GnRH合成肽疫苗在临床中的应用提供一定的理论数据,并为接下来的进一步研究奠定基础。