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背景人体固有免疫系统与肿瘤免疫逃逸之间的关系日益成为研究热点,CD47即是一个针对机体固有免疫系统的免疫检查点分子。肿瘤细胞高表达CD47分子,通过与巨噬细胞表面的SIRPα结合,向巨噬细胞传递“别吃我”(Don’teatme)的抑制性信号,介导免疫逃逸。研究发现,CD47-SIRP α通路在DLBCL免疫逃逸中发挥了重要的作用,CD47高表达可独立于IPI评分预测患者的不良预后。在一项早期临床试验中,CD47单抗对治疗复发难治性DLBCL展现出了令人鼓舞的疗效,使其愈加受到关注。尽管该靶点的发现已有近10年的时间,CD47-SIRP α通路在DLBCL免疫逃逸中的作用机制和临床转化价值仍存在诸多问题值得更加深入的研究。首先,DLBCL肿瘤异质性很强,CD47分子在不同亚型DLBCL中的表达特点尚不明确,CD47表达水平与DLBCL患者的临床特征、生存预后的关系仍需要通过免疫组化的方法进行验证。其次,DLBCL高表达CD47的分子机制尚不清楚,是否与某些已知的细胞遗传学异常相关值得探索。最后,CD47单抗的作用机制依赖于巨噬细胞的生理功能,而DLBCL患者的外周血单核巨噬系统可能存在功能缺陷,CD47单抗是否同样能通过激活巨噬细胞发挥抗肿瘤效应也有待实验进一步验证。对于以上问题的研究,一方面有助于加深我们对于DLBCL肿瘤免疫逃逸和CD47单抗抗肿瘤机制的理解,另一方面也有助于我们发现新的生物标志物以更好地对DLBCL患者的免疫逃逸状态进行评估和分层,从而指导未来靶向CD47-SIRPα通路的新型药物在DLBCL患者中的应用。目的1.研究CD47分子在DLBCL病理组织中的表达特点,分析CD47表达水平与DLBCL患者临床特征、生存预后之间的关系2.探索CD47基因位点拷贝数异常与CD47基因表达水平的关系及其预后价值3.探究DLBCL患者来源巨噬细胞是否存在功能缺陷以及CD47单抗对巨噬细胞吞噬功能的影响方法1.纳入北京协和医院诊治的74例初治DLBCL患者,采用免疫组化技术检测DLBCL肿瘤组织中CD47的表达水平,比较CD47在各亚型DLBCL中的表达差异,并回顾性分析CD47表达水平与患者临床特征、生存预后之间的关系。2.纳入两个独立的外部DLBCL队列(来自NCBI GEO数据库),结合拷贝数变异数据和基因表达数据进行生物信息学分析,探索CD47基因位点拷贝数异常与CD47基因表达水平的关系。3.纳入北京协和医院诊治的6例初治DLBCL患者和6例健康对照,利用磁珠分选外周血CD14+单核细胞,体外诱导分化成巨噬细胞,利用流式细胞术在体外检测巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬功能,并探究CD47单抗对巨噬细胞吞噬功能的影响。结果1.采用免疫组化的方法,56.5%的DLBCL患者肿瘤组织中可检出CD47高表达。其中,ABC亚型DLBCL的CD47表达水平明显高于GCB亚型,MYC阳性者中CD47高表达比例显著高于MYC阴性者(78%vs 41%)。CD47表达水平可独立于IPI评分预测接受R-CHOP方案治疗的DLBCL患者的PFS。2.在两个外部DLBCL队列中分别检出33例(16.3%)和34例(23.0%)患者携带CD47基因位点拷贝数增加,ABC亚型中的发生率显著高于GCB亚型。CD47基因拷贝数增加组患者的总生存显著劣于CD47基因拷贝数正常组,预后价值独立于IPI评分。CD47基因表达水平与CD47基因拷贝数呈正相关关系,CD47基因拷贝数越多,其基因表达量也越高。3.基线状态下,DLBCL病例组巨噬细胞的体外肿瘤吞噬率显著低于对照组巨噬细胞。不论是病例组还是对照组,CD47单抗均可显著增强体外巨噬细胞对肿瘤的吞噬功能。对照组巨噬细胞对CD47单抗的响应(△吞噬率)明显优于病例组巨噬细胞。结论1.免疫组化是一种便捷、可行的检测方法,可用于评判DLBCL病理组织中CD47的表达水平。不同类型DLBCL中CD47的表达水平存在明显差异,ABC亚型患者CD47表达水平显著高于GCB亚型,与文献中转录组测序结果基本一致。在DLBCL中,CD47高表达与MYC高表达密切相关。CD47高表达是接受R-CHOP方案治疗的DLBCL患者疾病进展复发的独立危险因素。2.约有20%的DLBCL患者存在CD47基因拷贝数增加,在ABC亚型患者中发生率更高。CD47基因位点拷贝数增加是导致部分DLBCL肿瘤细胞高表达CD47的分子机制之一。对于接受CHOP方案治疗的DLBCL患者,CD47基因拷贝数增加可独立于IPI评分预测患者的不良预后,提示这部分患者更有可能从靶向CD47治疗中获益。3.DLBCL患者来源的巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬功能减低,提示DLBCL患者的单核巨噬系统存在固有免疫功能缺陷。对于DLBCL患者来源的巨噬细胞,CD47单抗可显著增强其体外对肿瘤细胞的吞噬功能,发挥抗肿瘤效应。