严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS),是一种新出现的传染性疾病。由于本病传播速度快,人群普遍易感和死亡率较高,迄今还没有有效的药物和疫苗,目前仍未消除SARS会对人类的健康构成的严重威胁,因此加强SARS防治的基础和应用研究对保障人类的健康和生命安全具有重要意义。 SARS的病原体是一种新的冠状病毒,命名为SARS冠状病毒(SARS Coronavirus SARS CoV)。该病毒属正链RNA病毒,基因组全长约为30kb,与经典冠状病毒仅有约60%同源性,但基因组的组织形式与其它冠状病毒相似。其基因组5′端约三分之二的区域是编码病毒RNA聚合酶复合蛋白,而后三分之一的区域为编码病毒结构蛋白,按基因组上的排列顺序依次为刺突蛋白(S)、表面蛋白(E)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)。 S蛋白插在病毒的胞膜上,构成了病毒表面的主要暴露蛋白,形成突起,突起排列间隔较宽。S蛋白为非共价键结合二聚体,是Ⅰ型膜糖蛋白,也是结构蛋白中最大的蛋白,形态学上为鼓锤状。S蛋白有4个结构域:一个短的C末端构成胞质区;一个跨膜区和两个胞膜外域(分别称为S1和S2)。S蛋白具有多方面的功能,负责结合敏感细胞受体、诱导病毒胞膜和细胞膜以及细胞之间的融合、刺激机体产生中和抗体和介导细胞免疫应答。 目前,病毒免疫学研究比较公认的观点是,保护性抗体可以中和病毒,使病毒从体内得到清除。SARS-CoV在SARS自愈患者的血清中生长缓慢,说明人体可以产生针对病毒的抗体,这为研制有效的SARS疫苗提供依据。S蛋白是冠状病毒中最主要的抗原,此蛋白在病毒的入侵、中和抗体的产生方面起着非常关键的作用。对最近报道的多株SARS-CoV S蛋白突变位点的分析表明,该蛋白序列上有3个点突变即G77D,1224T,S577A位于S1区段。S2基因较为保守,位于M Helix附近,含有3个呈均匀分布的N连接糖基化位点,可能在S蛋白的免疫原性中起重要作用。因此,本研究选择了SARS-CoV(香港株)的全长S蛋白及其亚单位S1和S2作为SARS疫苗的候选抗原。 突起蛋白含有丰富的半胱氨酸,形成15对二硫键。研究表明针对S蛋白的中和性抗体多数是识别构象表位。因此,采用真核分泌表达有利于制备接近天然