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目的:通过立体定向方法向SD大鼠基底节区注射胶原酶,诱导大鼠实验性脑出血(Intracerebral Hemorrhage,ICH)模型,予以不同剂量新型止血药尖吻蝮蛇血凝酶(Hemocoagulase Agkistrodon,HCA)静脉治疗,观察治疗后不同时间点的血肿量、神经功能损伤、血脑屏障通透性等变化情况,明确早期注射不同剂量尖吻蝮蛇血凝酶的止血治疗效果,及其是否具有减少大鼠脑出血后血肿扩大、改善神经症状及预后的作用,并初步探讨其神经功能保护机制,为临床HCA治疗脑出血后早期血肿扩大、神经保护功能提供转化依据。方法:1.实验分组:将192只雄性SD大鼠(300g-350g)随机分为Sham组(n=42)、ICH组(n=22)、ICH+Vehicle组(n=42)、脑出血+低剂量(ICH+HCA0.1mg/Kg)(n=22)组、脑出血+中剂量(ICH+HCA 0.2mg/Kg)(n=22)和脑出血+高剂量(ICH+HCA 0.4mg/Kg)(n=42)组;2.模型制作及药物处理:实验性大鼠脑出血模型是右侧基底节区注射0.5UⅦ型胶原酶诱导(坐标:前囟前0.2mm,旁3.5mm和腹侧深5.5mm),药物处理组是术后1h经尾静脉注射给药一次;3.神经功能缺失评分:ICH24h、72h后采用m NSS评分及转角试验进行评价,分值越高代表神经功能损害越重,反之,则损伤越轻;4.凝血及生化功能检测:ICH24h后采取下腔静脉血分析各组凝血及生化功能是否有差异;5.血肿量检测:ICH24h后采用血红蛋白分光光度法及MRI检测出血肿量;6.血脑屏障检测:造模24h后用伊文思蓝法检测血脑屏障通透性,制作并观察脑组织大体切片;7.脑水含量检测:脑出血后72h用干湿重法检测脑水含量;8.血肿周围神经凋亡检测:脑出血后72h用TUNEL法检测血肿周围神经凋亡;9.炎症因子及血肿周围纤维蛋白原ELISA检测:ICH24h用炎症因子ELISA试剂盒检测血肿周围炎症因子变化情况;10.免疫印迹检测:脑出血后24h用免疫印迹法检测血肿周围MMP-9、Claudin-5、ZO-1含量;11.组织免疫荧光染色:脑出血后24h用免疫荧光染色检测小胶质细胞;12统计分析:采用SSPS17.0软件,结果均以Mean士SD表示,采用单因素方差分析,比较组间统计学差异,P<0.05为有统计学差异。结果:1.ICH24h后各组凝血及生化功能检测无统计学差异(P<0.05);2.神经功能缺失:ICH24h、72h后,与Sham组比较,ICH组及CH+Vehicle组神经功能显著缺失(P<0.001);高剂量治疗组可显著改善试验性脑出血大鼠神经功能缺损,3.,HCA止血效果确切,在出血ICH24h后,能够减少脑出血血肿扩大,具有量效关系,中、高剂量治疗组结果具有统计差异(P<0.05);4.中、高剂量治疗组可降低血脑屏障通透性,减少伊文思蓝在术后24h后的脑内沉积,具有统计差异(P<0.05);7.中、高剂量治疗组可降低术后72h后的脑水含量,减轻脑水肿,具有统计差异(P<0.05);8.造模72h后,HCA可显著减少血肿周围神经凋亡(P<0.05);9.造模24h后,血肿周围纤维蛋白原沉积增加,HCA显著降解其含量,并降低血肿周围炎症因子水平(P<0.05);10.造模后24h,脑出血血肿周围小胶质细胞活化增殖,MMP-9含量显著上升,而治疗组血肿周围MMP-9含量及小胶质细胞数量显著减少(P<0.05);11.造模后24h,脑出血血肿周围Claudin-5、ZO-1含量减少,而治疗组血肿周围Claudin-5、ZO-1含量增加(P<0.05)。结论:1.静脉注射尖吻蝮蛇血凝酶对脑出血大鼠的凝血及肝肾功能无显著影响;2.HCA止血效果确切,能够减少实验性大鼠脑出血后血肿扩大,具有量效关系;3.HCA能够显著减少血肿周围纤维蛋白原沉积,抑制小胶质细胞活化,减轻血肿周围炎症,下调MMP-9水平,减少血肿周围神经元凋亡,上调Claudin-5、ZO-1表达,降低血脑屏障通透性,缓解脑水肿,改善实验性大鼠脑出血后神经功能缺损。