罗汉果甜苷对肝星状细胞的影响及其作用机制研究

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目的:研究MOGS含药血清对HSC-T6的毒性、增殖和抑制纤维合成的影响,并探讨其抗肝纤维化的作用机制。  方法:设5%、10%和20%三个MOGS含药血清剂量组,设细胞培养中大鼠血清含量为20%,不足的量用生理盐水大鼠血清补齐。体外培养大鼠肝星状细胞(HSC-T6),进行以下试验:  1、体外培养HSC-T6细胞,并以MOGS含药血清干预。乳酸脱氢酶(LDH)法检测 MOGS含药血清对 HSC-T6的细胞毒性;MTT法检测MOGS含药血清对HSC-T6的生长抑制作用。  2、流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡的变化。  3、Hyp测试盒测定细胞上清液中Hyp含量,放射免疫法测定细胞上清液中HA和LN含量。  4、RT-PCR法测定其对Col-I、TGF-β1及TIMP-1 mRNA表达的影响。  结果:1、乳酸脱氢酶检测结果显示,MOGS含药血清对HSC-T6无特异毒性,MTT法检测结果表明,MOGS含药血清20%和10%浓度组可显著抑制HSC-T6的增殖(P<0.05或P<0.01)。  2、MOGS含药血清各剂量组作用48 h后,HSC-T6细胞周期产生明显变化,与NSs组对比均有显著性差异(P<0.01)。流式细胞术检测凋亡发现,与NSs组相比,MOGS含药血清各浓度组对HSC-T6细胞凋亡的影响皆有统计学差异(P<0.01),且正常细胞比例呈剂量依赖性下降。  3、细胞上清液中相关指标的测定发现,MOGS含药血清各浓度组细胞上清液中 Hyp含量与 NSs组比较均存在显著性差异(P<0.05或P<0.01);MOGS含药血清20%和10%浓度组细胞上清液中HA和LN含量与 NSs组比较存在显著性差异(P<0.05或 P<0.01),而5%浓度组对HA和LN含量无明显影响(P>0.05)。  4、RT-PCR对HSC-T6相关基因的测定结果显示,与NSs组比较,MOGS含药血清20%和10%浓度组对Col-I、TGF-β1及TIMP-1 mRNA表达均存在显著性差异(P<0.05或 P<0.01),而5%浓度组无明显变化(P>0.05)。  结论:MOGS含药血清可抑制HSC-T6增殖、对HSC-T6的细胞周期具有阻滞作用、诱导HSC-T6凋亡、并可抑制胶原的生成、促进ECM降解,这可能是其抗肝纤维化的部分作用机制。
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