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共轭亚麻酸(Conjugated linolenic acid, CLnA)是十八碳多不饱和脂肪酸的一组位置和几何异构体,具有抑制肿瘤形成、增强机体免疫力和影响脂代谢等功能。石榴酸(c9,t11,c13-CLnA, punicic acid, PA)和a-桐酸(c9,t11,t13-CLnA, alpha-eleostearic acid, α-ESA)是共轭亚麻酸的两种常见异构体。本文通过分步结晶法提取并纯化了石榴酸,研究了石榴酸和α-桐酸对子宫内膜癌细胞RL95-2凋亡的影响,并对其作用机制进行了初步探讨。首先通过单因素试验,分别研究了-18℃、4℃、25℃条件下,结晶时间对石榴酸纯度的影响。结果为：-18℃条件下结晶时间1h；4℃条件下结晶时间2h；25℃条件下结晶时间16h,乙醇与脂肪酸的比为1：2(v/v)时,石榴酸纯度可以达到95.2%。进一步分析了石榴酸和α-桐酸对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。MTT分析结果显示,在10μM至160μM的浓度范围内,石榴酸和α-桐酸处理人子宫内膜癌细RL95-248小时,能够明显抑制细胞活力,其作用呈现时间依赖性和剂量依赖性。石榴酸和α-桐酸的半数致死浓度(IC50)分别为30μM和60μM。应用Hoechst荧光染色荧光显微镜观察细胞核形态变化,石榴酸和α-桐酸处理48h后,细胞核体积明显变小,并呈现皱缩致密的颗粒状的强荧光,可见核固缩或断裂碎片。应用流式细胞术分析石榴酸和α-桐酸对细胞凋亡的影响,发现石榴酸和α-桐酸能够诱导人子宫内膜癌细胞RL95-2的凋亡。40μM的石榴酸和α-桐酸处理细胞48h,凋亡率分别为68.24%和44.91%。应用蛋白免疫印迹分析,发现石榴酸和α-桐酸能够上调Bax、活性型caspase-3、p53凋亡相关蛋白和降低了Bcl-2凋亡相关蛋白的表达。此外,α-桐酸和石榴酸还能够上调PPARy蛋白的表达。综上,本文应用分步结晶法提取并纯化了石榴酸,发现石榴酸和α-桐酸能够显著诱导子宫内膜癌RL95-2细胞的凋亡,其作用可能与对Bax、Bcl-2、caspase-3、p53等凋亡相关蛋白及脂质过氧化相关蛋白PPARy表达的调控有关。