苋菜凝集素基因(ACA)转入甜瓜及其在转基因植物中的表达

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构建了植物表达载体pBCACA,含ACA抗蚜基因,利用竹节花黄班驳病毒CoYMV启动子介导ACA基因的韧皮部特异高效表达,通过根癌土壤农杆菌介导的方法,将植物表达载体pBCACA上的ACA抗蚜基因导入甜瓜,获得了一批抗卡那霉素的转化再生植株。PCR检测结果初步表明ACA基因已整合到甜瓜总DNA中。 建立了一套完整的甜瓜遗传转化技术。(1)在甜瓜无均苗制备过程中,采用种子直接灭菌而不剥离种皮的方法;HgCl2法和NaOCl法相比较,HgCl2法比较适合甜瓜无菌苗的制备。(2)在甜瓜的转化和再生过程中,分化培养基中6-BA的浓度为1.0mg/L较适合本甜瓜品种;外植体选用子叶得到了较好的分化效果,而选用下胚轴没有得到再生植株;选取灰白和淡黄色的愈伤进行继代培养,可得到大量胚性愈伤。而绿色致密表面光滑的愈伤后期往往难以产生胚状体。 为了在有限的时间内证明ACA基因的抗蚜效果,本实验在将ACA基因转入甜瓜的同时将其转入了模式植物烟草。转基因烟草的PCR和Western blot分析结果初步表明,ACA基因已整合到植物染色体中并能够有效表达。虫试结果表明,转基因植株对蚜虫密度有明显的抑制作用,平均能抑制蚜虫密度为达65.65%。
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