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[目的]
活化性受体NKG2D(natural-killergroup2,memberD)及其配体是近来肿瘤免疫研究领域的热点之一。NKG2D表达于大多数NK细胞及部分γδT细胞、CD8+αβT细胞、NKT细胞及巨噬细胞表面。NKG2D受体及其配体同时参与宿主的固有性及适应性免疫反应。目前研究已明确肿瘤患者外周血NK细胞、NKT细胞表面NKG2D的表达较健康人下调,但其在γδT细胞表面是否同样表达下调,尚未有明确报道。NKG2D配体在大多数肿瘤细胞上高表达,但在食管癌中的研究较少。本课题旨在观察食管癌患者外周血及肿瘤浸润淋巴细胞中γδT细胞表面NKG2D的表达水平,并检测其配体ULBP3在食管癌肿瘤组织及相应癌旁组织中的相对表达量,同时检测血清中可溶性ULBP3的表达水平,探讨他们在肿瘤免疫中的作用及临床意义。
[方法]
本课题采用流式细胞术检测食管癌患者及健康志愿者外周血γδT细胞表面NKG2D受体的比例;同时,采用流式细胞术检测肿瘤直径大于3cm患者肿瘤组织及相应癌旁组织中γδT细胞表面NKG2D受体的比例;另外,应用实时荧光定量PCR技术以及免疫组织化学染色和Westernblot技术检测食管癌组织和癌旁组织中ULBP3mRNA及蛋白水平的表达,并结合患者的临床病理特征分析肿瘤组织中ULBP3mRNA相对表达量与临床病理特征之间的关系;此外,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测食管癌患者及健康志愿者血清中可溶性ULBP3的表达水平。
[结果]
(1)食管癌患者外周血γδT细胞表面活化性受体NKG2D表达水平为(31.49±6.12)%,健康对照组γδT细胞表面NKG2D表达水平为(40.53±8.66)%,食管癌患者组较健康对照组该受体表达率明显降低(P<0.05);随着TNM分期的增加,NKG2D的表达水平逐渐降低,表现为Ⅲ期食管癌患者NKG2D的表达水平明显低于Ⅰ-Ⅱ期患者该受体的表达水平(29.27±5.79%vs33.31±6.06%,P<0.05)。食管癌患者肿瘤组织中γδT细胞表面NKG2D的表达水平明显低于相应癌旁组织中该受体的表达水平(24.06±4.13%vs30.38±6.74%,P<0.05)。
(2)食管癌患者肿瘤组织中ULBP3mRNA的相对表达量为(4.96±6.11)×10-3,相应癌旁组织中ULBP3mRNA的相对表达量为(1.64±2.96)×10-3,肿瘤组织中ULBP3mRNA的相对表达量显著高于相应癌旁组织中的表达(P<0.01);结合临床病理资料进一步分析提示,食管癌组织中ULBP3mRNA的相对表达量与患者的年龄、性别、大小、分化程度及浸润深度无明显相关性(P>0.05),而与淋巴结转移情况及TNM分期存在一定相关性(P<0.05)。
(3)免疫组织化学染色结果显示ULBP3蛋白在55%(22/40)的食管癌肿瘤组织中呈阳性而在癌旁组织中无明显阳性表达;Westernblot结果显示食管癌肿瘤组织中ULBP3蛋白表达量较相应癌旁组织丰富。
(4)食管癌患者组血清中可溶性ULBP3的表达水平较健康对照组升高,两者比较差异具有统计学意义(194.4±109.3vs89.6±42.8,P<0.05)。
[结论]
食管癌患者γδT细胞表面NKG2D受体表达下调,其配体ULBP3在肿瘤组织中表达明显上调,并且血清中存在着可溶性ULBP3,可能与食管癌的免疫逃逸和恶性转化有关。因此,明确NKG2D及其配体之间的相互关系有助于了解食管癌的免疫病理机制,并为食管癌的免疫治疗提供新的思路。