柴胡疏肝散对功能性消化不良大鼠胃平滑肌细胞凋亡和NF-κB蛋白表达的影响

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目的:探讨柴胡疏肝散对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠胃平滑肌细胞凋亡和NF-κB蛋白表达的影响,以进一步揭示疏肝理气法促胃动力机制。方法:将48只健康SD大鼠随机分为正常组、模型组、多潘立酮组及柴胡疏肝散低、中、高剂量组。除正常组外,其余五组均通过改良夹尾激惹刺激法制造FD大鼠模型,于造模同一天分别使用多潘立酮水溶液(0.3g·L-1)和柴胡疏肝散低、中、高剂量水煎剂(0.16g?mL-1,0.32g?mL-1,0.64g?mL-1)进行灌胃,在造模4周后,测定各组大鼠胃排空率,采用HE染色观察胃组织病理变化,利用透射电子显微镜观察大鼠胃平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)线粒体形态,采用原位末端缺口标记法(TdT-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL)检测大鼠胃SMC凋亡情况;免疫组化法检测大鼠胃平滑肌细胞Bcl-2、Bax、NF-KB蛋白的表达。结果:各组大鼠胃组织病理学观察未见糜烂、溃疡、化生等器质性病变。透射电镜观察胃组织发现正常组大鼠胃SMC之间间隙正常,连接紧密,线粒体形态正常;模型组大鼠胃SMC间隙增宽,连接松弛,线粒体明显肿胀,亦可见凋亡小体;多潘立酮组和柴胡疏肝散低、中、高剂量组胃SMC间隙正常,连接紧密,线粒体肿胀减轻,凋亡小体减少。与正常组比较,模型组大鼠胃排空率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),胃平滑肌细胞Bcl-2表达显著减少(P<0.05),Bax、NF-KB表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,柴胡疏肝散低、中、高剂量组和多潘立酮组大鼠胃排空率均显著升高(均P<0.05),胃SMC线粒体损伤显著改善,细胞凋亡率和Bax、NF-KB表达水平均显著降低(均P<0.05),Bcl-2表达水平则显著升高(P<0.05);与多潘立酮组比较,柴胡疏肝散高剂量组胃排空率显著升高(P<0.05),胃SMC凋亡率和Bax、NF-KB表达水平均显著降低(均P<0.05),Bcl-2表达水平则显著升高(P<0.05);柴胡疏肝散低、中、高剂量组间比较,中、高剂量组胃排空率和Bcl-2表达水平较低剂量组有显著升高(均P<0.05),中、高剂量组胃SMC凋亡率、Bax、NF-KB表达水平较低剂量组显著降低(均P<0.05)。结论:1.柴胡疏肝散可以降低FD大鼠胃平滑肌细胞的凋亡率,从而发挥促胃动力作用,其机制是通过上调Bcl-2的表达、抑制Bax的表达来调节线粒体途径的细胞凋亡来发挥作用。2.FD的发生、发展可能与胃平滑肌NF-κB蛋白的表达密切相关;柴胡疏肝散可以减少NF-κB蛋白的表达,抑制NF-κB凋亡信号通路异常激活导致的胃平滑肌的损伤,促进胃肠动力的恢复。
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