烟草是茄科烟草属,一年生或有限多年生草本植物,其成熟叶片主要用于卷烟生产,具有极高的经济价值。烟草原产于南美洲,目前在国内广泛种植,经过多年选育,品系较多,其中’红花大金元’具有适应性广、产出品质高等特点,其叶片绿色,花序集中,花冠深红色,花期较长,外观较其他烟草品种更具有观赏价值,可作为观赏烟草种植。烟草赤星病是烟草成熟时期发生的一种由烟草赤星病菌(Alternaria longipes)侵染引起的真菌病害,严重制约烟草栽培,造成巨大经济损失。烟草’红花大金元’对赤星病抗性较弱,易感性强,叶片被病菌侵染后,极易形成大面积病斑,严重降低经济价值和整体观赏效果。在前期对烟草赤星病菌致病机制研究中发现,AlPep1基因缺失型菌株致病能力降低。为了进一步探究AlPep1基因在链格孢菌(A.longipes)致病机制中的作用,本研究以该基因为切入点进行研究,为烟草赤星病菌致病机制研究及特异性抗菌剂开发提供理论基础。本研究主要结果如下:1、对A.longipes 野生型菌株C-00和组氨酸激酶AlHK1基因缺失型菌株HK△4转录组数据进行分析,发现AlPep1基因在HK△4中相对表达量高于野生型菌株,推测AlHK1基因存在能抑制AlPep1基因的表达,且AlPep1基因可能是AlHK1调控下的一个关键致病因子。2、利用生物信息学手段对AlPep1基因氨基酸序列分析,发现其表达产物天冬氨酸蛋白酶极有可能为分泌型胞外蛋白,且稳定性较好。3、利用农杆菌介导的Ti质粒转化法对前期获得的AlPep1基因缺失型菌株△Pep1-3、△Pep1-5进行回补,成功构建回补载体,可供后续工作中转化真菌。4、利用农杆菌介导的Ti质粒转化法研究AlPep1基因在野生型菌株C-00的亚细胞定位,成功构建定位载体,并获得10株定位型菌株,其中2-1和2-9在荧光显微镜下荧光效果较强,能观察到荧光覆盖了整个菌丝,可以确定AlPep1基因表达产物天冬氨酸蛋白酶确实在细胞壁上分布。