植物类受体蛋白激酶几乎与所有重要的发育代谢过程有关,已知在植物的发育、自交不亲和、雄性不育、抗逆和抗病等生命活动过程中起重要的调控作用。这些激酶与它们的上下游蛋白质组成了一个复杂而有序的网络,调节着植物的正常生长发育和对外界环境的反应。到目前为止,已经开展功能研究的植物类受体激酶数目却非常有限。本实验选取9个水稻类受体蛋白激酶基因,通过制备针对水稻类受体蛋白激酶的抗体,了解水稻中蛋白激酶在不同发育时期的表达信息,为功能研究积累数据。1.我们通过抗原决定簇的预测,体外表达、纯化了蛋白激酶的片段。将纯化后的蛋白质用做免疫原获得了针对目的基因的多克隆抗体。与以全长蛋白质做免疫原相比可以比较容易的获得足量的高纯度的蛋白质;与合成多肽做免疫原相比成本较低。本实验证明了此路线的可行性。2.在原核表达系统中,表达了5个激酶基因片段的蛋白质:Os04g49460、Os01g06280、Os03g21540、Os03g43670、Os01g48000,大量表达纯化了5个蛋白质,制备了多克隆抗体,利用融合蛋白质进行检测,证明抗体免疫原性良好。3.对4个激酶基因(Os04g52860、Os03g12470、Os03g61310、Os07g02350)的抗原表位片段进行了多肽的合成,以合成的多肽为抗原,制备了相应的多克隆抗体,抗体经水稻不同组织的材料Western blotting检测,验证抗体的特异性良好,从而进一步说明了由合成多肽制备多克隆抗体这一技术路线的可行性。4.从以93-11不同组织为参试材料的Western blotting结果来看,所制备的9个抗体在水稻蛋白质有很高的特异性,获得的信号基本上都有一条比较清晰的主带。其中Os04g49460为一个组成型表达的激酶蛋白质,Os07g02350和Os04g49460的表观分子量与预测分子量相符,Os03g21540、Os04g52860、Os03g43670、Os03g12470、Os01g48000和Os03g61310蛋白质的表观分子量低于预测分子量,Os01g06280蛋白质的表观分子量高于预测分子量,激酶蛋白质Os03g21540在苗期却具有显著的时期表达特异性。5.对NCBI上公布的来自274个文库的100万条以上的EST进行分析,9个激酶基因的EST数量分布大致均匀,与Western blotting结果揭示的组成型表达相符合,与ATPase、HSP81-3、EGF-1 alpha和RuBisCo等对照基因相比,这几个激酶基因的EST数目很少,说明他们都属于低丰度转录的基因。