甜瓜CmERFV-4和CmERFIII-15基因的克隆、载体的构建及功能分析

来源 :内蒙古大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:supercow
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植物激素乙烯在果实成熟和衰老过程中发挥重要的作用,通过乙烯信号转导途径来引起乙烯反应,使果实在色泽、质地、风味和香气等方面发生显著的变化。乙烯应答因子(Ethylene-responsive factors,ERFs)是乙烯信号转导途径中的下游组分,可以认别和结合靶基因5'上游启动子顺式作用元件GCC盒,从而调节多种功能基因的表达来调控果实的发育。  本研究从甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实中克隆得到CmERFV-4、CmERFⅢ-15基因cDNA,大小分别为554 bp、672bp,并分别构建了超表达载体pPZP221(35 S-ERFV-4-NOS)、pPZP221(35 S-ERFⅢ-15-NOS)和RNAi载体pART27-ERFV-4、pART27-ERFⅢ-15。实时荧光定量PCR检测结果表明,CmERFV-4基因相对于其他组织在根中的表达量最高,相对于果实其它发育时期在40天时的表达量最高,而CmERFⅢ-15基因相对于其他组织在叶子中的表达量最高,相对于果实其它发育时期在40天时的表达量最高。通过农杆菌介导的瞬时表达技术,将含超表达载体和RNAi载体的农杆菌菌液注射到果实中,注射部位表现出提早成熟性状和推迟成熟性状。定量PCR检测结果表明,分别超表达CmERFV-4、CmERFⅢ-15基因后,两基因的表达量与对照相比,都有大幅度上升,表明外源导入基因得到了表达。分别干扰CmERFV-4、CmERFⅢ-15基因后,内源CmERFV-4基因的表达量与对照相比上升,而内源CmERFⅢ-15基因的表达量与对照相比下降,成功抑制了内源CmERFⅢ-15基因的表达。
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