论文部分内容阅读
背景和目的：
宫颈癌是世界范围内第二大女性恶性肿瘤。流行病学和分子生物学研究表明,人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌及癌前病变的主要病因。HPV主要通过其致癌蛋白E6和E7分别与-p53和视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)结合,使其功能丧失,从而发挥致癌作用。
抑癌基因p16INK4a的产物p16INK4a蛋白在多种原发性肿瘤组织中表达缺失,但在宫颈癌及癌前病变中却特异性高表达。多数研究认为HPV感染宫颈后其致癌蛋白E7使pRb灭活,阻断了p16INK4a-cyclin D1-CDK4/6-pRb这一调节通路,使p16INK4。失去负反馈抑制,在细胞内异常积聚而过表达,但其具体机制及其与HPV感染间的关系尚未阐明。
人端粒酶RNA组分基因(human telomerase RNA component,hTERC)是端粒酶活性和端粒长度维持的限速和关键因子。近年来的研究发现hTERC基因扩增与宫颈癌和癌前病变关系密切,且其扩增可能与HPV感染有关。但hTERC基因与p16INK4a基因在宫颈病变中关系的研究尚未见报道,且目前对于hTERC基因的研究主要集中于宫颈细胞学标本,在组织标本上的研究报道较少。
本研究旨在探讨p16INK4,、Rb和hTERC在宫颈癌及癌前病变中的改变,探索三者在宫颈癌发生发展中的作用、相互关系及其与HPV感染的关系。
材料和方法：
选取河南省人民医院病理科2008年3月至2009年8月手术切除及门诊活检的宫颈石蜡包埋组织标本100例。其中正常对照宫颈组织20例,宫颈上皮内瘤变(cervical intracpithelial neoplasia,CIN)58例(CINⅠ级18例,CINⅡ级16例,CINⅢ级24例),宫颈鳞癌22例。
采用免疫组织化学EnVision两步法检测p16INK4a和pRb蛋白的表达,并利用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测p16INK4a、Rb和hTERC基因的表达,同时通过表面等离子谐振法进行HPV分型检测。
利用SPSS17.0软件进行统计学分析。采用x2检验、Fisher确切概率法检验、Kruskal-Wallis检验、Nernenyi法检验和Mann-Whitney U检验。相关分析采用Spearman秩相关。以P＜0.05为差异具有统计学意义。
结果：
1.HPV在正常对照组、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈鳞癌中的阳性率分别为10.00％,33.33%,62.50%,83.30%和95.45%,随宫颈病变级别的升高,HPV阳性率逐渐增高,差异具有统计学意义(x2=42.795,P＜0.05)。CINⅡ、CINⅢ和宫颈鳞癌组与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);CINⅡ及以上病变与CINⅠ及正常组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。
2.20例正常宫颈组织中未检测到p16INK4a蛋白的表达,从CINⅠ级到宫颈鳞癌,p16INK4a蛋白的表达逐渐增强,差异具有统计学意义(P＜0.05)。CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈鳞癌组与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。
3.从正常宫颈到宫颈鳞癌,随着病变级别的增高,pRb蛋白表达逐渐减弱,差异具有统计学意义(P＜0.05)。CINⅡ、CINⅢ和宫颈鳞癌组与正常对照组和CINⅠ组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。
4.CIN和宫颈鳞癌组织中p16INK4。和pRb蛋白的表达呈负相关(r=.0.641,P＜0.05)。
5.p16INK4a蛋白的表达在HPV阳性组明显高于HPV阴性组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。pRb蛋白的表达在HPV阳性组明显低于HPV阴性组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。
6.20例正常宫颈组织中未检测到p16INK4a基因拷贝数的增加,从CINⅠ级到宫颈鳞癌,随病变级别升高,p16INK4a基因拷贝数增加细胞的百分值逐渐增高,差异有统计学意义(P＜0.05)。CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈鳞癌组与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。
7.FISH结果显示,正常宫颈、各级CIN和宫颈鳞癌组织中均检测到Rb基因的缺失,但差异无统计学意义(P=0.227)。
8.正常宫颈、各级CIN和宫颈鳞癌组织中均检测到hTERC基因扩增,随着宫颈上皮病变程度的加重,hTERC基因扩增逐渐增加,差异有统计学意义(P＜0.051。CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈鳞癌组与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。
9.相关性分析显示,CIN及宫颈鳞癌中p16INK4a基因拷贝数增加与hTERC基因扩增呈正相关(r=0.548,P＜0.001)。
10.p16INK4a基因拷贝数的增加和hTERC基因扩增在HPV阳性组明显高于阴性组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
1.p16INK4a基因拷贝数的增加与宫颈病变程度相关,可能是宫颈鳞癌发生过程中的早期事件。
2.p16INK4a基因拷贝数的增加和hTERC基因扩增可能是宫颈鳞癌形成过程中密切相关的两个重要分子事件。
3.宫颈病变中p16INK4a、Rb和hTERC的改变与HPV感染有关。