藜麦黄酮提取工艺、抗氧化活性及抗衰老研究

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藜麦(Chenopodium quinoa),是一种原产于南美洲的双子叶植物,属藜科藜属,具有独特、丰富而全面的营养价值。本论文以藜麦种子为原料,提取藜麦黄酮,对其进行分离纯化,研究藜麦黄酮的体内外抗氧化作用、延缓果蝇衰老功能及其分子机制,为藜麦黄酮应用于保健食品提供理论依据。主要研究结果如下:(1)藜麦总黄酮提取工艺优化。通过正交试验,得出最佳工艺参数为:温度90℃、料液比(g/mL)1:10、回流时间2 h、乙醇浓度90%。此条件下,藜麦总黄酮提取量为3.86 mg/g。(2)采用大孔吸附树脂纯化藜麦总黄酮提取物,比较4种树脂(HPD400、AB-8、D001、D101)对藜麦总黄酮的静态和动态的吸附及解吸性能,其中最理想的是D101型树脂,对其进行了纯化工艺优化,最佳大孔树脂纯化工艺为:pH2、流速2 BV/h、0.3 mg/mL的黄酮水溶液上样、8 BV水洗、丙酮洗脱。此条件下,纯化黄酮吸附率为80.91%。纯度可由初提物的7.12%提高到28.53%。(3)利用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20对D101型树脂纯化后的藜麦总黄酮进行分离纯化工艺研究。结果表明最佳工艺条件:流速1 mL/min,以30%、40%、60%、70%、90%、100%的甲醇水溶液各洗脱柱子1 h,在此条件下,总黄酮含量为81.57%,分离得到单一黄酮化合物,其纯度为93.63%。(4)以Vc和BHT作为对照,研究了D101型树脂纯化前后的藜麦总黄酮对DPPH、·OH、H2O2的清除能力及金属离子的螯合作用。结果表明:纯化前后的藜麦总黄酮抗氧化活性在一定范围均出现剂量依赖关系,均具有显著的体外抗氧化活性。(5)通过果蝇生存实验,与对照组相比,50 μg/mL、200 μg/mL、500 μg/mL黄酮剂量组,显著(P<0.05)延长雌雄蝇的平均寿命、半死亡寿命、最长寿命,提高范围为1.25-28.68%,而1 mg/mL、2 mg/mL剂量组与对照组相比,均显著(P<0.05)缩短雌雄果蝇的生存时间,缩短范围为1.08-20.63%。在体内实验中,分别测定50μg/mL、200μg/mL、500μg/mL剂量组果蝇组织总SOD活力、MnSOD活力、CuZnSOD活力、CAT活力,除雄性各剂量组MnSOD活力提升不显著(P>0.05)外,其余雌雄蝇相关抗氧化酶最高酶活力与对照组相比,均显著提升(P<0.05),提高范围为0.61~35.88%,其中雌蝇200μg/mL剂量组CAT活力升高最明显达到35.88%。且某些酶活力与生存指标之间,存在着显著(P<0.05)正相关性。(6)荧光定量PCR技术检测结果表明,实验组与对照组相比,藜麦黄酮50 μg/mL、 200μg/mL、500 μg/mL剂量组显著(P<0.05)上调雌雄蝇CuZnSOD、CAI、Egfr、 S6K、MAPK基因及雌蝇MnSOD基因相对表达量,显著(P<0.05)下调Mth基因相对表达量。抗氧化相关基因的表达水平与酶活力之间存在着显著(P<0.05)正相关性。
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