背景:变态反应疾病(过敏性疾病)被世界卫生组织认为是当前世界性的重大卫生学问题，世界各国变态反应性疾病的总发病率高达10-30％。近些年来其发病率在逐步增高。在引起过敏性疾病众多吸入性变应原中，尘螨是导致呼吸道变态反应性疾病的最重要因素。与过敏性疾病有关的尘螨主要为屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus，Derp)和粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae，Derf)。它们喜好在温暖、潮湿环境中繁衍，以人或动物的皮屑、指甲及毛发为主要食物，多藏匿于床褥、枕头、地毯、衣服、毛绒玩具或家具内。 随着社会生活水平的提高，空调已成为城市家庭的必备电器，且人们在密封空调环境内工作、生活和学习时间越来越长。本课题组在前期研究过程中，偶然发现空调滤网灰尘中存在大量的尘螨。空调滤网灰尘是否也是尘螨嗜好的栖居场所之一及其季节消长规律和分布规律、该尘螨变应原(即尘螨的分泌物、排泄物以及死亡降解产物)是否经空调送风而排入室内空气中，国内外目前尚未见报道。 国外已有以酶联免疫方法开发的商品化的检测尘螨主要变应原的试剂盒供应，但存在价格昂贵(约五百英磅一盒)，在国内没有代理点等问题而未能在我国广泛应用。在国内尚未见对于定量检测尘螨变应原含量方法学研究的报道。研究目的 1.探讨空调滤网灰尘中尘螨的季节性消长规律和分布地域性差异，为进一步预防过敏性疾病(如哮喘、过敏性鼻炎等)和防螨空调的研制提供理论依据。 2.探讨空调滤网中尘螨变应原与哮喘发病的关系，为哮喘患者制定防螨措施做好变应原回避提供重要的参考依据。 3.建立检测环境中屋尘螨2组变应原(Derp2)含量的双抗体夹心ELISA法。研究内容与方法于2004年8月份在北京、上海、南昌、广州、深圳五个城市，用随机抽样方法选择319台家庭空调(北京48台，上海55台，南昌72台，广州60台，深圳84台)，进行空调滤网灰尘的采集，称重后在解剖镜下对灰尘中尘螨进行计数、封片，在光镜下进行形态学鉴定。其中深圳地区进行为期一年(2004年7月至2005年6月)的实验，共采集了232份样品。用IndoorBiotechnologies公司的试剂盒对采集回来的空调滤网灰尘样品进行尘螨主要变应原(屋尘螨1组变应原(Derp1)、粉尘螨1组变应原(Derf1)和尘螨2组变应原(Der2)的定量检测。采集广州地区30例哮喘患者和30例正常家庭卧室空调开机前后空气中的灰尘及空调滤网灰尘，采用IndoorBiotechnologies公司的试剂盒检测其Derf1、Derp1和Der2的浓度。以终浓度为0.5mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-Thiogalactoside，IPTG)对本实验室保存重组子BL21star/pET24a/Derp2进行诱导表达，得到的蛋白经Ni-NAT纯化后梯度透析复性。采用尘螨过敏病人血清进行蛋白印迹(Western-Blotting)检测。用纯化后的重组Derp2蛋白(rDerp2)免疫新西兰兔得到抗Derp2多克隆血清，经检验合格后用饱和硫酸铵(NH4)2SO4进行盐析沉淀，脱盐后以70mmol/LPH6.3的PB对DEAE-SepharoseF.F阴离子交换层析柱进行纯化，再用过碘酸钠氧化法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记，此酶标抗体为双抗体夹心法的检测抗体。用DMEM培养Derp2单克隆抗体，用ProteinA亲和层析柱纯化，作为捕获抗体。用棋盘滴定法测定包被抗体的最佳浓度及酶结合物的最佳稀释度而建立检测Derp2的双抗体夹心ELISA方法。 研究结果1.空调滤网灰尘中存在尘螨变应原，其分布有明显的季节性特征，每年最早在3月份即可出现，7、8月份达高峰，11月份消失。 2.广州、深圳地区空调滤网灰尘以粉尘螨为主，屋尘螨次之；南昌、上海地区空调滤网灰尘中屋尘螨比粉尘螨略多；北京地区没有检出螨虫。 3.广州地区家庭空调滤网灰尘中Derp1、Derf1和Der2浓度分别为0.84±0.74、3.17±2.01、2.91±2.14ug/g灰尘，深圳地区分别为1.68±1.31、3.14±2.75、2.75±1.82ug/g灰尘，南昌地区分别为3.51±2.39、1.91±1.30、2.25±1.78ug/g灰尘，上海地区分别为3.09±2.10、1.62±1.58、2.40±1.88ug/g灰尘。四个城市家庭空调滤网灰尘中的Der2、广州与深圳地区的Derf1、上海与南昌地区的Derp1含量均高于引起尘螨过敏性疾病致敏的阈值2μg/g灰尘。4.哮喘患者家庭空调开机前空气中Derp1、Derf1和Der2的浓度分别为0.23±0.07，2.62±1.08，0.92±0.41ng/m3，开机后三者的浓度分别为0.49±0.25，3.73±1.22，1.35±0.81ng/m3，三者的浓度开机前后相比差别均有显著性意义(P＜0.05)；正常家庭哮空调开机前空气中Derp1、Derf1和Der2的浓度分别为0.33±0.19，5.21±2.36，2.77±1.16ng/m3，开机后三者的浓度分别为0.48±0.23，7.18±3.33，4.18±1.61ng/m3，三者的浓度开机前后相比差别均有显著性意义(P＜0.05)。5.棋盘滴定法显示包被用的Derp2单克隆抗体最佳工作浓度为1ug/ml，HRP标记的抗Derp2多克隆抗体的最佳稀释度为1∶1000。建立的双抗体夹心法检测极限为2ng/ml，与参考标准方法相比，特异性为0.876，敏感性为0.900，准确性为0.886，χ2检验得P＞0.05，新建立的双抗体夹心ELISA方法与参考标准方法检出率无差别。 结论1.首次证实空调滤网灰尘中存在尘螨变应原，并有明显的季节消长规律和地区分布特征，优势螨种是粉尘螨与屋尘螨。 2.空调滤网灰尘中尘螨变应原随空调送风而排入室内空气中。空调是室内尘螨变应原的重要来源之一，其滤网灰尘中尘螨变应原的存在是引起过敏性疾病的重要诱因之一。 3.国内首次制备出Derp2多克隆抗体；成功培养出Derp2单克隆抗体。 4.建立了检测尘螨Derp2变应原的双抗体夹心法ELISA法。该方法操作简单，重复性好，灵敏度高，可用于测定环境中Derp2含量、监测回避变应原措施的有效性、流行病学调查。