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毛叶枣(Zizyphus mauritiana Lam.)又名印度枣、西西果、台湾青枣,是鼠李科枣属热带亚热带优稀果树。毛叶枣果实脆甜可口、营养丰富,含有果糖、葡萄糖,维生素B、C,钙、磷、烟酸等,且毛叶枣成熟期一般为冬春季节,正值水果淡季,市场前景看好。但由于毛叶枣种质研究较少,命名的法则不规范,因此,极有可能造成同物异名或是同名异物现象。而且,随着毛叶枣产业的迅猛发展,表现出品种良莠不齐、果实的品质差等问题,已成为毛叶枣业蓬勃发展的瓶颈,因此,如何选育优良的品种、提高毛叶枣果实品质成为一个急需解决的问题。
本研究以21个毛叶枣种质为试验材料,通过对毛叶枣果实的外在品质、风味、内在品质的测定,并进行叶片的ISSR标记,旨在找出影响毛叶枣品质的主要指标和评价方法,建立毛叶枣ISSR反应体系,为毛叶枣的良种选育、品种鉴定与分类、遗传图谱的构建、分子辅助育种等奠定初步基础。结果表明:
1、毛叶枣果实的外观品质指标除果实纵径外,其余指标在品种间差异极显著,不同毛叶枣种质的单果重量介于25.59~99.02g之间,平均单果重为59.48g。果形指数在0.81~1.27之间,果形在卵圆形~长圆形之间;果皮颜色除福枣有微红外,其余均为黄绿色。
2、毛叶枣果实的风味主要是由糖、酸含量和糖/酸比决定。毛叶枣果实糖/酸比介于10.07~84.07之间,果实的风味主要决定因子为含酸量。
3、毛叶枣营养品质主要由糖、酸、维生素C等组成,毛叶枣不同种质可溶性总糖含糖量差异极显著,介于8.52~14.59%之间,平均为10.33%;毛叶枣果实的含酸量较低,平均为0.29%;毛叶枣各种质维生素C含量差异极显著,平均含量为42.48mg.100g-1。
4、通过主成分分析认为影响毛叶枣果实品质的主要因素是单果重、可食率和可溶性总糖。
5、通过模糊综合评判可筛选出所有种质中品质最好的是未知种,其次为蜜丝和图枣;最差的是缅甸圆果种。
6、通过果实品质模糊聚类分析,当λ=8.0时,可以将供试种质分为三类:I类为蜜丝、蜜枣、高朗一号、金蜜枣、大世界1、蜜枣2号、脆蜜、未知种、图枣、TJ10、大世界2、福枣、肉龙种、碧云种、留香枣共15份种质;II类:缅甸圆果、缅甸长果和滇刺枣;Ⅲ类为大果蜜枣、新世纪和蜜王。
7、使用改良的CTAB(小量)法可以有效的解决毛叶枣基因组总DNA提取中的褐化问题,提取的DNA的A260/A280介于1.7~1.9之间,说明具有较好的纯度,完全可以用于ISSR分析。
8、毛叶枣ISSR的最佳扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性45s,50℃退火1 min,72℃延伸2 min,35个循环;72℃延伸10 min后4℃保存。
9、毛叶枣ISSR反应的最佳体系为:在25μl的反应体系含2.59μL浓度为10×pCR的Buffer,3.75μL浓度为2.5mmol.L-1的dNTPs,1.5μL浓度为0.5U.gL-1的Taq酶,1.5μL浓度为5pm.μL-1的引物,0.75μL浓度为100ng.μL-1模板DNA,灭菌双蒸水15μL。
10、ISSR聚类分析,建立聚类分支树状图,以0.67为阀值将21份材料分为3个类群,第I类为蜜丝枣,第II类全部是来自台湾种群,第III类是来自中国的滇刺枣野生种,来自缅甸的缅甸长果种和缅甸圆果种。
11、从两种模糊聚类分析结果看出,21份毛叶枣种质不存在同物异名或同名异物现象,大世界1和大世界2为不同品种。