S100P和S100A2蛋白在人外泌汗腺的表达及SD大鼠足垫汗腺的生长发育研究

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目的:  1.研究S100P和S100A2蛋白在人外泌汗腺的表达情况,并联合特定角蛋白进行免疫荧光双染以区分外泌汗腺的分泌部和导管部。2.研究SD大鼠足垫汗腺发生发育和功能成熟的过程。  方法:  1.获取人体正常皮肤标本,制成石蜡包埋标本后进行连续切片,利用免疫荧光组织化学染色法检测S100P和S100A2在外泌汗腺的表达情况,然后利用免疫荧光双染检测以下蛋白:α-SMA/S100P,CK14/S100A2,CK7/S100A2,CK15/S100P和CK18/S100A2,在荧光显微镜下观察并拍照。2.获取SD大鼠从E16.5天-E21.5天、出生后P1-P14天、3周、4周及成年大鼠的足垫全层皮肤标本,进行石蜡包埋及切片,行HE染色,及免疫荧光组织化学染色法检测以下蛋白:CAⅡ、F-actin、β-catenin、CollagenⅣ;免疫荧光双染检测:α-SMA/CK14;并利用碘-淀粉实验检测不同发育阶段SD大鼠足垫的发汗功能。  结果:  1.人外泌汗腺免疫荧光组织化学染色结果显示:S100P仅表达于汗腺导管部的内层细胞,S100A2表达于除表皮内导管外的其他导管部的外层细胞,两者在分泌部均不表达。2.SD大鼠足垫皮肤HE染色结果显示:E19.5天表皮基底层出现汗腺胚芽,P1天汗腺细胞长入真皮浅层,并呈条索状继续向真皮深层生长,P7天部分汗腺形成中央腔,P10天分泌部腺体初步形成球状结构。荧光染色显示:汗腺侧膜持续表达β-catenin,P6天汗腺细胞开始表达CollagenⅣ,P9天F-actin开始在顶膜表达,P13天以上极性蛋白均分别完整表达于汗腺侧膜、基底膜和顶膜。CAⅡ的荧光染色和α-SMA+CK14的双染结果显示:CK14在汗腺细胞持续表达,P6天部分汗腺细胞开始表达CAⅡ和α-SMA,而内层细胞CK14表达则逐渐减弱,P13天分泌部散在的分泌细胞表达CAⅡ,分泌细胞完全不表达CK14,肌上皮细胞表达CK14和α-SMA,导管部细胞均表达CK14,不表达CAⅡ和α-SMA,与成年大鼠的表达情况一样。碘-淀粉实验结果显示:直到P14天SD大鼠足垫汗腺才开始出现泌汗功能,P21天泌汗功能得到进一步完善。  结论:  1.S100P和S100A2可作为外泌汗腺导管部不同细胞的标记蛋白,将S100P或S100A2联合CK7或CK15或CK18进行免疫荧光组织化学双染,可快速、准确、直观地区分外泌汗腺分泌部和导管部。2.SD大鼠出生时足垫汗腺仅完成了初级发育,细胞分化以及汗腺结构和功能成熟主要发生在出生后,SD大鼠足垫汗腺非常适宜作为研究对象用于研究汗腺的发育及发育过程中的分子调控机制。
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