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桦褐孔菌(Inonotus obliquus),是一种属于真菌门、担子菌门、伞菌亚门、伞菌纲、锈革孔菌目、锈革孔菌科、纤孔菌属的药用真菌。我们又称之为为黑桦菌、白桦茸等,素来都有“西伯利亚灵芝”之美称。桦褐孔菌被作为一种神奇的药物,主要归因于这种真菌含有多种次级代谢产物,如多糖、三萜、多酚以及甾体等具有强活性的物质。这些具有生物活性的物质对降血糖、降血脂、肝病、抗菌治疗以及抗癌治疗有显著的效果。但是由于其子实体较稀少、价格昂贵、人工培养不成熟,因此,利用液体深层发酵获得桦褐孔菌的生物活性物质具有重要的意义。经研究表明,促进剂能有效地促进细胞膜的通透性,从而影响真菌次级代谢产物的合成。本论文研究的目的是探索三类18种促进剂对桦褐孔菌胞内外多酚的影响,筛选出最佳促进剂,同时探索其对多酚抗氧化活性的影响以及多酚组分的影响。此外,继续我们课题组木质纤维素的研究,探究表面活性剂与木质纤维素之间的作用对桦褐孔菌胞内外多酚产量的影响。1.亚油酸与吐温20为桦褐孔菌发酵多酚的最佳促进剂,其中胞内外多酚分别为202.20mg/L、726.47mg/L、31.78mg/g和103.74mg/L、307.99mg/L、9.28mg/g,分别是空白对照组的7.5倍、14.5倍、9.9倍和3.8倍、6.1倍、2.9倍。18种促进剂中葵花油、油酸、吐温80、吐温20对菌丝体量生长的促进作用最显著,分别达到12.67g/L、12.65g/L、12.05g/L、12.04g/L,分别提高了12.4%、12.2%、6.9%、6.8%。2.测定不同培养基中培养所得到的胞内外多酚的DPPH自由基清除率从而鉴定其抗氧化活性。18种促进剂中丙酮对胞内多酚DPPH自由基清除率最强,是空白的3倍;吐温20对胞外两层多酚的清除率最强,分别达到80.52%、84.51%,亚油酸次之。3.测定添加亚油酸与吐温20培养基所得的胞内外多酚的IC50值IC50值要远低于空白对照组,其中添加吐温20的要低于添加亚油酸的,同时验证了添加吐温20后发酵所得的胞内外多酚的DPPH自由基清除率要强于亚油酸培养基。4.相较于对照培养基,添加亚油酸与吐温20培养基的多酚组分中具有较强活性的多酚类物质如ECG、EGCG、phelligridin G、桑黄素B以及骨碎补内酯的含量较高。其中,添加亚油酸培养基提取的EGCG、phelligridin G的产量分别达到232.09mg/g、317.23mg/g、204.75mg/g和28.14mg/g、12.82mg/g、204.75mg/g,高于吐温20培养基中的提取物。而ECG、桑黄素B、以及骨碎补内酯在吐温20的培养基中的含量要高于亚油酸培养基的提取物,含量分别达到287.68mg/g、333.45mg/g、184.47mg/g,17.78mg/g、13.16mg/g、14.49mg/g和26.72mg/g、12.99mg/g、35.67mg/g。5.亚油酸与吐温20的最佳添加浓度和添加时间均是1g/L、第0天。用乙酸乙酯与正丁醇萃取得到胞外多酚,用丙酮提取胞内多酚。所测得的胞外多酚产量分别为202.20mg/L、726.47mg/L和103.74mg/L、307.99mg/L,分别是空白对照组的7.5倍、14.5倍和3.8倍、6.1倍。胞内多酚产量为31.78mg/g、9.28mg/g,分别是空白对照组的9.9倍、2.9倍。6.在培养基中添加麦秆与5种表面活性剂,探索木质纤维素与表面活性剂的混合对桦褐孔菌生物量与胞内外多酚的影响。采用同样测定方法,结果表明,表面活性剂中吐温80与麦秆的组合对生物量的促进作用最大,说明吐温80能较好的打开麦秆的结构。曲拉通与麦秆的组合对胞内外多酚含量的促进率最大,提高了影响物质的吸收,乙酸乙酯层、正丁醇层的胞外多酚和胞内多酚的产量分别达到153.42mg/L、845.75mg/L、59.40mg/g,均超过了单独亚油酸的添加对胞内外多酚的影响。同时,对曲拉通与麦秆组合的进行动态分析,变化趋势符合菌种的生长与次级代谢产物的分泌。