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斜纹夜蛾(Spedoptera litura)是一种杂食性农业和林业害虫,国外主要分布于朝鲜、日本、印度、澳大利亚等国,在我国各省、市、自治区均有发生,其寄主范围极广,能够危害109科389种寄主植物,是各种农作物和绿化植物的重要害虫。尽管斜纹夜蛾核型多角体病( Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedroviruse,SpltMNPV )已在中国商品化并大规模用来控制棉花叶虫,但它缓慢的杀虫速度、较窄的宿主范围、对紫外线敏感等特点限制了其在全国范围的推广。因此,开发高效重组SpltMNPV杀虫剂显得日益迫切。SpltMNPV日本株(C3)(又命名为SpltMNPV II)是Kamiya等从日本全国各地野外感病幼虫收集、分离到189个SpltMNPV克隆中繁殖率和毒力极强的一种新型病毒株。本研究在SpltMNPV II的基础上成功构建并筛选了egt缺失的,表达BmKITa1成熟肽的重组SpltMNPV,并测定其生物学活性。主要研究成果:1.运用分子克隆方法构建了重组转移载体Psk-Δegt-Pph-egfp-Pph- BmK ITa1,载体质粒和SpltMNPV II基因组DNA共转染SpLi细胞,经多轮荧光斑法和有限稀释法相结合成功筛选出重组病毒SpltMNPV-Δegt-Pph-egfp-Pph- BmK ITa1,并测定其生物学活性。和野生型病毒相比,在病毒浓度为107 polyhedra/larva时,重组SpltMNPV-Δegt-Pph-egfp-Pph- BmK ITa1的杀虫速度提高了50%。2.运用分子克隆方法构建了重组转移载Psk-Δegt-Pph-egfp-ie-1-BmK ITa1,载体质粒和SpltMNPV II基因组DNA共转染SpLi细胞,经多轮荧光斑法和有限稀释法相结合成功筛选出重组病毒SpltMNPV-Δegt-Pph-egfp–ie-1-BmK ITa1,并测定其生物学活性。和野生型病毒相比,在病毒浓度为107 polyhedra/larva时,重组SpltMNPV-Δegt-Pph-egfp-ie-1- BmK ITa1杀虫速度提高了23%。3.运用分子克隆方法成功构建了BmKITa1和egfp融合表达的重组转移载体Psk-Δegt-Pph-BmKITa1-egfp。载体质粒和SpltMNPV II基因组DNA共转染SpLi细胞后发现荧光细胞,但经一轮筛选后荧光消失。成果在进一步研制高效斜纹夜蛾重组生物杀虫剂中具有重大意义。