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BMPR-IB基因属于BMP家族的Ⅰ型受体,存在于许多细胞类型中,主要调节细胞生长和分化。在绵羊中,BMPR-IB基因中的碱基突变导致了氨基酸的改变,使得BMPR-IB基因部分失活,改变了BMP信号通路的传递机制,导致卵巢颗粒细胞对配体的抑制不再敏感,进而提高了绵羊的排卵率和繁殖力。近来发现,BMPR-IB基因的缺失,使小鼠卵巢颗粒细胞减少且聚集在一起,引起小鼠发情周期不规律和假孕反应。本研究以猪卵巢颗粒细胞为试验材料,利用流式细胞术、real time RT-PCR等方法检测沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响；用RNAi技术阻抑BMPR-IB基因表达,在此基础上,添加FSH,利用流式细胞术、real time RT-PCR等方法检测沉默BMPR-IB基因对FSH诱导的猪卵巢颗粒细胞的影响；用BMP配体(BMP6)激活BMP信号通路,用real time RT-PCR方法检测通路中受体及Smads的表达量。1 BMPR-IB-siRNA转染猪卵巢颗粒细胞及其效率检测根据猪BMPR-IB基因序列合成小分子RNA,利用脂质体转染猪卵巢颗粒细胞以及流式细胞仪检测转染效率,在BMPR-IB-siRNA转染浓度为100nmoL时,转染效率为63.22%；利用荧光定量PCR检测BMPR-IB mRNA表达水平,在作用36h时,BMPR-IB-siRNA抑制效果最好,试验组较空白组下降65%。利用流式细胞仪检测干扰后颗粒细胞凋亡率。结果显示,siRNA试验组凋亡率(16.86%)显著高于对照组(10.55%),且相应地抗凋亡基因Bcl-2表达量显著下降,表明沉默BMPR-IB可促进猪卵巢颗粒细胞的凋亡。2沉默BMPR-IB对FSH诱导猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响为了沉默BMPR-IB对FSH诱导猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响,采用RNAi技术沉默BMPR-IB基因然后添加FSH。利用流式细胞仪以及real time RT-PCR检测细胞的凋亡率和凋亡基因的表达量,以及类固醇相关合成酶的表达量。结果表明：FSH能抑制细胞凋亡,沉默BMPR-IB基因后再添加FSH使细胞凋亡率减弱但是效果不明显,与之对应的原凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的变化不明显；FSH能使FSHR的表达量增加,但是BMPR-IB表达的消减抑制了FSH增加自身受体的表达量；另外,发现添加FSH能使CYP19a1和CYP11a1的表达量增加,但BMPR-IB表达的消减抑制了FSH引起的CYP19a1和CYP11a1的表达的增加。3沉默BMPR-IB对BMP6诱导的BMP信号通路中相关基因表达的影响为了研究BMPR-IB-siRNA转染猪卵巢颗粒细胞对BMP信号通路的影响,采用RNAi技术沉默BMPR-IB基因,阻断信号传导,另一方面,添加BMP6来激活通路,利用real time RT-PCR分别检测阻抑或激活后受体和Smads的表达量。结果表明,沉默BMPR-IB能使受体BMPR-IA和BMPR-II的表达量增加,Smad1、Smad5和Smad8基因的mRNA表达量下降,Smad7基因的mRNA表达量显著增加。而添加配体BMP6使受体BMPRIA和BMPRII的表达量下降,Smad1、Smad5和Smad8基因的mRNA表达量增加,Smad7基因的mRNA表达量下降。BMPR-IB-siRNA阻抑通路后用BMP6激活,与BMP6组相比,受体基因BMPRIA和BMPRII以及Smadl和Smad5的表达都显著变化,但Smad8的表达量明显下降,而与抑制组相比,差异不显著；且无论添加BMP6与否,Smad7在沉默BMPR-IB后表达量都增加。