玉米小斑病、灰斑病和大斑病是三种世界性的真菌性病害,在我国和欧美等国家地区都曾发生不同程度的流行,对玉米产量和品质造成很大的影响。利用玉米自身的抗源,选育优良玉米品种是一种直接有效防治三种病害发生的方法。而开展抗性基因的克隆与分子标记辅助选择可以为抗病育种提供有效的理论与技术支撑。但是目前检测玉米植株抗病基因最常用的方法是以核酸为基础的PCR法,该法具有准确、检测限低、适用范围广的特点,但需要专业技术人员和相应的实验仪器设备,特别是无法进行现场快速检测,不适合现场快速检测和即时检测应用。因此探索建立一种灵敏度高、成本低和操作简便的玉米抗病基因快速检测方法可以为育种在田间检测提供有效的工具。ZmCCoAOMT2是一个广谱性的抗性基因,对小斑病、灰斑病和大斑病都具有抗性。本研究旨在前人对该基因克隆与功能分析的基础上,建立一种简单快捷的检测Zm CCo AOMT2蛋白的方法,为抗病植株的田间快速鉴定提供一种有效的工具。本研究利用生物信息学分析,密码子优化合成Zm CCo AOMT2基因;成功构建了原核表达载体并转入大肠杆菌BL21表达菌株,对其诱导条件如IPTG浓度、诱导时间、诱导温度等进行优化,发现在IPTG浓度为0.5 m M、20℃诱导表达18 h时间的蛋白的可溶性表达量最高;Ni-NAT亲和层析纯化后,大肠杆菌表达的大部分本底蛋白可与Ni柱结合,而目的蛋白Zm CCo AOMT2只有部分与Ni柱结合,纯度可达80%左右;将纯化后的Zm CCo AOMT2蛋白分高中低剂量组,分别对小鼠进行间隔21天免疫,结果显示高中低剂量组均有特异性抗体产生,与阴性对照相比,差异显著,血清效价可达1:25600。并在四免后30天进行小鼠超免,进行细胞融合,制备单克隆抗体;本研究建立了阻断ELISA的方法筛选鉴定及制备Zm CCo AOMT2重组蛋白的单克隆抗体,经三次亚克隆筛选出一株特异性强的杂交瘤细胞株12C6-C12,并进行小鼠腹水m Ab Zm CCo AOMT2的制备;另外将纯化后的Zm CCo AOMT2蛋白分别对新西兰大白兔进行间隔21天免疫,与阴性对照相比,差异显著,血清效价可达1:51200。Zm CCo AOMT2蛋白单克隆抗体和多克隆抗体的制备为试纸条的研制奠定了基础。