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目的:第一部分:以正常昆明小鼠肝组织内的三种(二、四、八倍体)肝细胞核DNA含量间的比值为2或4的倍数关系为理论依据,再次探讨以正常小鼠单个完整体积肝细胞核为单位测算肝细胞核DNA含量的组织原位三维测算法的可靠性与准确性。第二部分:(1)运用细胞图像分析系统对487例常规宫颈脱落细胞涂片进行DNA倍体分析,观察利用细胞图像分析仪对宫颈脱落细胞核DNA倍体分析结果在宫颈上皮内瘤样变筛查中的作用。(2)运用HPV分型检测、宫颈脱落细胞核DNA倍体分析、宫颈脱落细胞学和活检组织病理学诊断检测宫颈上皮内瘤变和早期宫颈癌的患者,将它们的检测结果进行比较和分析,研判它们在宫颈上皮内瘤样变和早期宫颈癌筛查中的作用,为宫颈上皮内瘤样变和早期宫颈癌筛查提供更有效辅助诊断方法的实验依据;同时分析宫颈癌发病年轻化与HPV感染的联系,为宫颈癌发病年轻化的原因提供一定的临床辅助信息。(3)以宫颈活检组织病理学诊断结果为“评价标准”,对宫颈脱落细胞学级别的诊断存在疑议的病例(ASCUS及无法确诊的其它细胞学级别)且高度怀疑有癌变可能的高危人群的真实病变程度进行进一步验证,并为相应疾病进展速度的判断、治疗措施、疗效和病变转归的评价提供更多有价值的辅助信息。方法:第一部分:选取10只成年健康雄性昆明小鼠,每只小鼠各取一块肝组织。每块肝组织制作4μm和11μm两种厚度的组织切片各一张,行改良Feulgen染色,TIGER细胞图像分析仪分别用组织原位三维测算法与以细胞核截面为单位的测量法测算肝组织内二、四、八倍体单个肝细胞核的DNA含量;计算三种倍体单个细胞核DNA含量的比值,并与理论倍数值进行比较。第二部分:对在广东省妇幼保健院进行宫颈液基细胞学筛查结果有异常或疑议的487例患者样品(487例患者均有宫颈活检组织病理诊断报告,其中高度怀疑具备HPV感染高危因素的210例病例在患者知情的情况下行HR-HPV检测),再次进行液基细胞薄层(TCT)制片,经改良Feulgen染色法染色后,进行宫颈脱落细胞核DNA含量测量与倍体分析。分析比较常规脱落细胞学检查、HPV分型检测、细胞核DNA倍体分析结果与活检组织病理学诊断结果,并对HPV感染率、ASCUS的病理学级别与年龄是否相关进行分析。结果:第一部分:用组织原位三维测算法获得的每只小鼠肝组织内三种肝细胞核DNA含量的比值(4c/2c、8c/4c、8c/2c):呈接近2或4的倍数关系,比值与理论倍数2、4的差异无统计学意义。以薄切片上肝细胞核截面为单位计算的三种肝细胞核DNA含量及其均值的比值的均值远小于相应理论倍数值,差异有统计学意义。第二部分:(1)487例病例经常规宫颈脱落细胞学检查后,474例(97.33%)异常:HSIL占10.1%;LSIL占52.8%;ASCUS占34.5%;DNA倍体分析结果显示,337例异常;病理组织学诊断结果:≥CINⅢ占11.3%;CINⅡ占14.8%;CINⅠ占45.2%。以活检组织病理组织学检测结果为“评价标准”,宫颈脱落细胞核DNA倍体分析(DNA倍体分析参照DNA倍体分析标准①)的灵敏度(Se)为92.1%,常规宫颈脱落细胞学检测方法的灵敏度(Se)为75.6%。(2)210例患者有HR-HPV检测结果,HR-HPV阳性者97例,HR-HPV阳性率在两种年龄组间的差异有统计学意义,年轻组的感染率高于中老年组。(3)比较和分析高度怀疑具备HR-HPV感染高危因素的210例女性患者的HR-HPV的检测结果、常规细胞学检测与DNA倍体分析结果。DNA倍体分析和HR-HPV检测在不同的病理学诊断级别的差异整体上均有统计学意义,以病理学检测结果为“评价标准”,宫颈脱落细胞核DNA倍体分析的灵敏度(Se)为86.0%,特异度(Sp)为36.3%,HR-HPV检测的灵敏度(Se)为75.0%,特异度(Sp)为66.4%。常规细胞学检测的灵敏度(Se)为81.3%,特异度(Sp)为31.0%。(4)在复查两次或以上常规脱落细胞学诊断为ASCUS的140例患者中,以活检组织病理学检测结果为“评价标准”,HR-HPV检测与DNA倍体分析均阳性的病例数随着病理级别的升高而升高(≥CINⅡ阳性率最高),均阴性的病例中,病理学诊断级别为≤CINI。结论:第一部分:本实验初步验证组织切片上运用组织原位三维测算法获得的以单个完整细胞核体积为单位的细胞核内DNA总量的可靠性好。应用细胞图像分析仪在组织切片原位通过合适的抽样和测量计算,可较准确地获得以单个完整细胞核体积为单位的细胞核内化学物质总量。第二部分:(1)常规宫颈脱落细胞学检测与DNA倍体分析相结合可提高临床宫颈癌与癌前病变筛查的阳性检出率的灵敏度。(2) HR-HPV感染率增加且年轻患者HR-HPV阳性率较高,可能是宫颈癌发病年轻化的一项重要因素。(3)HR-HPV检测结合宫颈脱落细胞核DNA倍体分析可提高宫颈上皮内瘤样变筛查的灵敏度和特异性。(4)应用活检组织病理组织学检查、HR-HPV检测、细胞核DNA倍体分析三种方法,对常规宫颈脱落细胞学诊断为ASCUS病变的真实级别的重新诊断、治疗效果以及预后提供较形态学更深层的辅助信息。