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背景和目的:心肌炎是指由感染或非感染性因素引起的心脏病理免疫过程的临床和组织学表现,通常会继发其他心血管疾病,如急性心力衰竭和慢性扩张型心肌病等。心肌炎的临床表现复杂多样,且病程的轻重缓急悬殊,临床上对心肌炎的治疗方法有一定局限性,如非甾体类抗炎药在小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎中被证明有毒害作用,现有的诊治方法只能降低住院率,但是病死率并没有明显下降。因此对新型抗心肌炎药物的研究应运而生。细粒棘球蚴囊液作为包虫感染宿主后在宿主内形成的包囊的主要成分,可以调节宿主免疫应答,使包虫长期寄生在宿主体内但无明显症状。细粒棘球蚴囊液可以通过调节宿主免疫系统抑制宿主炎症反应。本实验研究细粒棘球蚴囊液对LPS引起的大鼠心肌细胞H9C2炎性损伤的保护作用,并探讨其发生的可能机制,为心肌炎的治疗提供新的方法和思路。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9C2,使用LPS(终浓度为10μg/ml)建立心肌炎损伤模型,不同浓度细粒棘球蚴囊液(200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml)作用于该模型后,用相差显微镜观察各组H9C2细胞形态;使用MTT实验检测各组H9C2细胞生存率。200μg/ml细粒棘球蚴囊液作用于LPS诱导的细胞炎性损伤模型后,流式细胞仪检测H9C2细胞凋亡水平和活性氧水平,Real Time PCR方法检测H9C2细胞TLR4/NF-κB信号通路相关分子tlr4、p38、NF-κB和Il6的mRNA水平,Western Blot方法检测H9C2细胞TLR4/NF-κB信号通路相关TLR4、磷酸化p38和NF-κB蛋白的表达水平,阐明细粒棘球蚴囊液对LPS诱导H9C2细胞炎性损伤的保护效果及可能机制。结果:1.MTT法检测细胞生存率,结果显示,与FBS组相比,各浓度细粒棘球蚴囊液组的细胞生存率没有降低,表示细粒棘球蚴囊液在体外对H9C2细胞没有毒性作用,与LPS组相比,CF 200μg/ml+LPS组(p=0.012)和CF100μg/ml+LPS组(p=0.006)细胞生存率均升高,且细胞形态接近正常H9C2细胞长梭形形态,提示细粒棘球蚴囊液对脂多糖诱导的H9C2细胞损伤有保护作用。2.Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测CF 200μg/ml+LPS组细胞凋亡水平,结果显示,与LPS组(74.25%±20.45%)相比,CF 200μg/ml+LPS组细胞凋亡比例(64.00%±15.07%)有明显降低趋势,但没有统计学差异。3.DCFH-DA法检测CF 200μg/ml+LPS组ROS水平,结果显示,与LPS组(11211.33±1028.65)相比,CF 200μg/ml+LPS组的活性氧水平(2023.67±636.48)明显降低(p<0.001)。4.Real Time PCR检测各组H9C2细胞TLR4/NF-κB信号通路相关分子tlr4、p38、NF-κB和Il6的mRNA水平,结果显示:与LPS组tlr4(2.41±1.26)、NF-κB(7.97±5.83)相比,CF 200μg/ml+LPS组tlr4(0.94±1.08)、NF-κB(4.11±2.28)mRNA水平呈降低趋势,但没有统计学差异,p38和Il6的mRNA水平无明显变化。Western Blot检测各组H9C2细胞TLR4/NF-κB信号通路相关TLR4、磷酸化p38、NF-κB蛋白的表达水平,结果显示:与LPS组TLR4(0.82±0.63)、NF-κB(1.09±0.20)相比,CF 200μg/ml+LPS组的TLR4(0.68±0.19)、NF-κB(0.96±0.56)蛋白的表达水平降低但没有统计学差异;与LPS组(0.79±0.15)相比,CF200μg/ml+LPS组(1.00±0.09)的磷酸化p38蛋白水平升高但没有统计学差异。结论:1.细粒棘球蚴囊液对H9C2细胞的生长没有毒性,且可保证细胞正常生长;细粒棘球蚴囊液对LPS引起的H9C2细胞炎性损伤具有保护效应,并可促进H9C2细胞生长。2.细粒棘球蚴囊液通过抑制细胞凋亡和ROS水平对LPS诱导H9C2细胞炎性损伤产生保护效应,而不抑制TLR4/NF-κB信号通路上相关分子的表达。