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盆腔脏器脱垂(pelvic organ prolapse,POP)是指由于盆底支持力量薄弱造成的盆腔器官位置下降及功能异常,是一种多因素、多基因、多环节共同作用的复杂性疾病。将致POP的易感基因与其所涉及的信号通路共同探究,发现两者在POP发生发展过程中的作用,对理解POP的发病机制意义重大。有研究显示WNK1(With-No-lysine(K)-1)基因参与了POP发生发展,为POP的致病基因;WNK1基因还可调控Wnt/β-catenin信号通路的激活与关闭。同时研究发现,POP损伤机制与异常的Wnt/β-catenin信号通路密切相关。然而WNK1基因与Wnt/β-catenin信号通路在POP发生发展进程中的作用及其关联性暂未可知。盆底功能的正常行使依赖于盆底支持组织中成纤维细胞和胶原纤维状态及功能的稳定。其中成纤维细胞的活化受到Wnt/β-catenin细胞信号通路的调控;然而Wnt/β-catenin信号通路是否影响盆底支持组织中成纤维细胞活性及胶原蛋白的表达暂未可知。目的通过测定盆腔脏器脱垂患者主韧带组织中WNK1基因、Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白Wnt16(Wingless/integrated-16)、β-catenin、FZD5及I型胶原蛋白(Collagen I,COL1)的表达,初步探讨WNK1基因及Wnt/β-catenin信号通路在POP致病过程中的作用,从而为POP提供新的诊断思路与治疗途径。材料与方法筛选2017年01月~2018年05月在郑州大学第三附属医院收治的盆腔脏器脱垂(POP)患者27例为POP组,按盆腔器官脱垂定量分度法(Pelvic Organ Prolapsed Quantitation,POP-Q)分度,均为III~IV级;筛选同时间段同院妇科良性病的非盆底功能障碍性疾病患者21例为对照组。两组采用腹腔镜下、腹式或经阴道全子宫切除术进行组织学标本的取材,选取子宫主韧带组织进行研究。采用HE染色观察平滑肌束及成纤维细胞形态、数量变化,并使用Masson染色进一步观察胶原纤维的数量以及形态;采用RT-qPCR及Western-blot分别检测WNK1、Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白(Wnt16、β-catenin、FZD5)及COL1的mRNA及蛋白相对表达量。所得结果数据用(?)±s表示,用SPSS 21.0及Graphpad prism 6软件对数据进行统计学分析,WNK1与Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白(Wnt16、β-catenin、FZD5)间相关性采用Pearson相关系数分析,两组间参数比较采用独立样本t检验。P<0.05认为具有统计学意义。结果1.HE染色及Masson染色结果HE染色显示与对照组相比,POP组主韧带组织中平滑肌束弥漫性萎缩、断裂,成纤维细胞数量明显减少、形态受损及排列紊乱。Masson染色显示与对照组相比,POP组主韧带组织中胶原纤维表达稀疏松散、细碎,部分溶解,断裂不连续,细胞间间隙较宽。2.RT-qPCR结果POP组主韧带中WNK1、Wnt16、β-catenin、COL1的mRNA相对表达量分别为0.868±0.061、0.884±0.048、3.451±0.214、0.661±0.008,显著低于对照组1.115±0.078、1.116±0.053、4.316±0.286、1.066±0.072,差异均有统计学意义(P=0.0145,P=0.0023,P=0.0171,P=0.0002);FZD5的mRNA相对表达量为1.810±0.114,显著高于对照组1.262±0.107,差异有统计学意义(P=0.0013)。3.Western-blot结果POP组主韧带中Wnt16、β-catenin、WNK1、COL1等蛋白相对表达量分别为0.427±0.028、0.347±0.029、0.529±0.0378、0.561±0.029,显著低于对照组0.584±0.032、0.558±0.0378、0.740±0.0576、0.663±0.0362,差异均有统计学意义(P=0.0006,P<0.001,P=0.0027,P=0.0316);FZD5蛋白相对表达量为0.557±0.0394;对照组为0.483±0.0493,两组间相较无明显差异(P=0.2454)。4.WNK1基因与Wnt/β-catenin信号通路间的关联分析在POP组中,WNK1与Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt16、β-catenin表达呈正相关(r=0.480,r=0.471),与FZD5表达呈负相关(r=-0.512)。5.WNK1基因、Wnt/β-catenin信号通路与各参数关联分析POP组27例患者其中绝经时间<5年患者11例,绝经时间≥5年患者16例,各对应测定值相比,绝经时间≥5年组WNK1、Wnt16、β-catenin及COL1表达较绝经时间<5年组均显著降低,FZD5表达增高,差异均有统计学意义(P=0.031,P=0.0356,P=0.0189,P=0.0269,P=0.0327)。POP组27例患者其中阴道分娩次数<2次患者13例,阴道分娩次数≥2次的患者14例,各对应测定值相比,阴道分娩次数≥2次组WNK1、β-catenin及COL1表达较阴道分娩次数<2次组均显著降低,差异均有统计学意义(P=0.0207,P=0.0412,P=0.0118)。结论盆腔脏器脱垂患者主韧带组织中WNK1基因与Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt16、β-catenin表达均下降,可能POP发生发展与两者表达受抑制有关;WNK1基因与Wnt/β-catenin信号通路表达呈正相关,可能共同参与了POP的致病过程。