论文部分内容阅读
结直肠癌是胃肠道常见的恶性肿瘤之一。尽管其发病机理和关键因素研究有了很大的进展,但是,与其他实体瘤一样,仍有许多领域有待深入研究。甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（06-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）是一种普遍存在的DNA修复酶,具有保护染色体免受烷化剂的致突变、致癌和细胞毒作用的损伤,MGMT基因的高甲基化和表达缺失可能参与人类多种肿瘤的发生发展。胸苷酸合成酶（thymidylate synthase,TS）是dTMP合成过程中的限速酶,在细胞周期和增殖中发挥重要作用。国内外最新的研究表明,结直肠癌组织中MGMT和TS的表达水平与肿瘤对抗癌药物5-FU的化疗敏感性以及患者的预后关系密切。为此,本文应用免疫组织化学方法分析结直肠癌、高级别上皮内瘤变、低级别上皮内瘤变和癌旁结肠黏膜的MGMT和TS的蛋白表达水平以及与结直肠癌的临床病理参数的相关性,以探讨MGMT和TS蛋白表达在结直肠癌的发生发展和防治策略上的应用价值。一,材料与方法收集2004-2006年浙江大学医学院附属第二医院收治的78例原发性结直肠腺癌根治术标本,26例正常黏膜、13例低级别上皮内瘤变和11例高级别上皮内瘤变组织蜡块标本。其中结直肠癌患者男性23例,女性55例,年龄范围29-94岁,平均年龄61.58岁。78例结直肠癌中TNMⅠ期2例、Ⅱ期26例、Ⅲ期45例和Ⅳ期5例。根据WHO肿瘤分类分级标准,高分化腺癌13例,中分化腺癌37例,低分化腺癌28例。免疫组织化学采用EnvisionTM鼠/兔-HRP广谱检测系统,检测系统试剂盒和TS单克隆抗体（TS106）购自Dako公司,TS工作浓度为1:50,MGMT单克隆抗体（MT23.2即用型）购自上海长岛试剂有限公司。每张切片厚4um,二甲苯脱蜡、梯度酒精水化,置于3%H2O2内5分钟灭活内源性过氧化物酶。抗原修复后,自然冷却20分钟,滴加一抗,一抗常温下孵育两小时,PBS冲洗,2分钟×3次;滴加二抗-HRP多聚体,37℃温箱内孵育20分钟,PBS冲洗2分钟×3次;DAB显色,蒸馏水冲洗、苏木素复染,乙醇脱水,二甲苯透明,中性树脂封固。用已知阳性的结肠腺癌组织作为阳性对照。MGMT在细胞核或/和细胞浆出现棕黄色为阳性着色,TS在胞浆或/和胞核出现棕黄色颗粒为阳性。在肿瘤组织染色的典型区域随机观察5个高倍视野,计算阳性细胞的比率。无细胞着色为阴性（—）,阳性细胞＜10%为（+）,阳性细胞在10%-50%为（++）,阳性细胞＞50%为（+++）。采用统计学软件包SPSS11.5进行统计学分析,不同组间结果采用X2检验。二,结果MGMT蛋白在正常黏膜、低级别和高级别上皮内瘤变中阳性表达着色在细胞核（图1,图2）,而在结直肠癌中阳性表达着色在细胞核和细胞浆（图3）。正常黏膜阳性率为26.9%（7/26）,低级别上皮内瘤变和高级别上皮内瘤变则分别为54.5%和53.8%,而在结直肠癌阳性率为62.8%。组间差异具有统计学显著意义（P＜0.01）。TS蛋白在正常黏膜、低级别上皮内瘤变和高级别上皮内瘤变中阳性着色在细胞浆（图4,图5）,阳性表达率分别为23.1%、38.5%、36.4%。TS在结直肠癌中阳性着色在细胞浆和细胞核（图6）,阳性表达率为61.5%,组间差异具有统计学显著意义（p＜0.01）。MGMT蛋白表达与年龄、肿瘤部位、肿块大小、大体类型、组织学类型、浸润深度和TNM分期等无关（p＞0.05）;而与患者的性别（P＜0.01）和组织学分级（P＜0.01）相关。TS蛋白表达与患者的年龄（p＜0.05）和性别（p＜0.05）有相关性,而与肿瘤部位、肿块大小、大体类型、组织学类型、组织学分级、浸润深度和TNM分期均无关（p＞0.05）。在78例结直肠癌中,MGMT和TS蛋白同时表达阳性的病例为35例,占44.9%,同时表达阴性的16例占20.5%,其余27例则呈MGMT和TS表达的不一致性,占34.6%。组间差异具有统计学意义（p＜0.05）。三,结论1、MGMT蛋白表达异常可发生在结直肠癌的全过程,从上皮内瘤变到进展期腺癌。检测结直肠肿瘤组织中的MGMT蛋白表达水平,不但有助于发现结直肠癌癌前易感病变,而且对结直肠癌的诊断和分化程度判断也具有重要的参考价值。2、TS蛋白在结直肠癌中的表达明显高于正常结肠黏膜组织,差异具有统计学显著性意义（p＜0.05）。说明TS在结直肠癌发生发展中可能发挥着重要的作用。3、在结直肠癌中,TS和MGMT的表达呈现多种表型,统计学分析组间差异具有显著性意义（p＜0.05）,提示在结直肠癌中同时检测MGMT和TS蛋白的表达水平对患者的预后分层研究和制定合理有效的化疗方案均有一定的实用价值。