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宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一。人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染是诱发宫颈癌的根本原因,而90%以上的宫颈癌与高危型HPV(尤其16、18型HPV)感染有关。HPV表达的早期蛋白E5/E6/E7可通过与宿主细胞内PDZ结构域相互作用,营造适合其转化、增殖的体内环境,引起一系列的疾病,甚至诱导肿瘤的发生。近年研究发现HPV16-E6单一氨基酸突变体(F47R)能抑转HPV-16的效应,是一种潜在的新型抗肿瘤药物。高危型HPV18-E6蛋白与HPV16-E6相似,其上类似位点的突变是否也具有相似的抑癌效果呢?本论文就此进行了探索,并获得如下结果：(1)以HeLa细胞基因组为模板,成功扩增了HPV18-E6蛋白的编码基因,构建了其真核表达载体pcDNA3.1-E6与pEGFP-Cl-E6;利用重叠PCR与常规重组相结合法扩增并构建了HPV18-E6单突变体蛋白(F49R与F127R)真核表达载体pcDNA3.1-E6F49R, pcDNA3.1-E6F127R、pEGFP-Cl-E6F49R、pEGFP-Cl-E6F127R,利用定点突变试剂盒构建了双突变体蛋白(F49R/F127R)的真核表达载体pcDN A3.1-E6F49R-F127R与pEGFP-Cl-E6F49R-F127R。(2)将HPV18-E6及其突变体蛋白的真核载体转染细胞,RT-PCR首次显示HeLa细胞内HPV18-E6的转录、表达水平有差异。借助MTT、吖啶橙/溴化乙啶双染法、稳转细胞株生长曲线差异分析等首次证实了HPV18-E6蛋白有促癌细胞增殖的效果；而HPV18-E6突变体蛋白均能有效抑制感染HPV-18的癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡；HPV18-E6突变体对差异表达HPV18-E6的Hela细胞株作用效果不同；三种突变体比较而言,单突变体HPV18-E6F49R和双突变体HPV18-E6F49R-F127R的抑癌效果更好。(3)人工合成了针对大肠杆菌密码子优化的HPV18-E6突变体F49R的编码基因,成功构建该突变体与穿膜肽(TAT或R9)的融合蛋白原核表达载体,实现重组蛋白在大肠杆菌中的表达。经优化,在15。C和180rpm转速下,添加0.1mmol/LZn2+,利用终浓度为0.06mmol/L的IPTG诱导20h,重组HPV18-E6(F49R)突变体-穿膜肽(TAT或R9)融合蛋白的可溶性表达量最高。虽然重组蛋白含有His标签,但常规的Ni柱亲和层析不能有效纯化目标蛋白,通过阴离子交换层析与锌柱亲和层析相结合,获得纯度85%以上的重组HPV18-E6(F49R)突变体-穿膜肽(TAT或R9)融合蛋白,细胞实验证实重组蛋白也能有效抑制Hela细胞增殖,HPV18E6F49R-TAT和HPV18E6F49R-R9蛋白对表达HPV18-E6全长的HeLa细胞的半数抑制浓度分别约在280μg/m1和260μg/ml。