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玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是由镰刀菌产生的一种真菌毒素,广泛存在于各种食品及饲料中,主要污染玉米、小麦、大麦、小米和燕麦等谷物及其制品。玉米赤霉烯酮主要具有生殖毒性、免疫毒性、肝肾毒性和细胞毒性,同时对内分泌系统、肿瘤细胞的产生有一定的影响。因此研发特异、灵敏的检测方法实现对玉米赤霉烯酮的快速、定量检测具有重大意义。相较于基于抗体的免疫检测方法,适配体作为一种新型的分子识别元件,具有更多的优势:靶分子范围广、亲和力高、特异性强、制备方便、稳定性好、易修饰。适配体是经体外筛选得到的能与靶标特异性结合的寡核苷酸序列,可以是DNA或RNA,长度通常在15-100个核苷酸,能够形成特定、复杂的三维结构,与靶分子结合形成稳定的复合物。借助于生物传感器技术,多种基于适配体的检测方法在医药、食品安全等领域得到广泛应用。本研究分别采用氧化石墨烯-SELEX和亲和柱-SELEX两种方法探索了玉米赤霉烯酮适配体筛选。在氧化石墨烯-SELEX法筛选方案中,体外化学合成的全长为80个核苷酸中间含44个随机核苷酸序列的ss DNA文库,以氧化石墨烯为筛选介质,ZEN为靶标分子,共进行了19轮筛选,对第六轮和第十九轮的筛选产物克隆并测序,将第六轮的42个阳性克隆送去测序得到40条序列,31条不同的序列;第十九轮的46个阳性克隆送去测序得到45条序列,27条不同的序列。挑选了部分序列采用SYBR Green I法进行活性鉴定,结果显示所挑选的序列均与ZEN无结合活性。在亲和柱-SELEX法筛选方案中,则采用长为91个核苷酸的三段库,中间的一段是含19个核苷酸的固定序列,在其左右两侧分别是长度为10和20个核苷酸的随机序列,两端则是固定不变的引物结合序列。筛选方法则是通过互补序列固定筛选库,然后让靶标分子与互补序列竞争,洗脱结合靶标分子的序列。在此次筛选过程中,同时采用琼脂糖凝胶电泳法和荧光法监控文库是否固定成功。共进行了17轮,至第16轮时筛选效率达到40%,于是通过SYBR Green I法和基于结构转换的荧光法对筛选产物进行活性鉴定,亦未得到具有识别活性的核酸适配体。