共轭亚油酸β-谷甾醇酯的酶催化合成及其功能性质的研究

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植物甾醇酯可以降低人体血液胆固醇的水平,已经作为功能性成分应用到食品生产中。本文以植物甾醇中存在最广泛的β-谷甾醇为原料,合成共轭亚油酸β-谷甾醇酯(CLS)并研究了其功能性质。 确定了CLS的薄层层析(TLC)条件:反应液3μL,在环己烷/无水乙醚(19∶1,v/v)混合溶剂中展开,用5%的硫酸乙醇溶液喷雾,在120℃烘箱中显色15min。将TLC条件应用到硅胶柱层析分离纯化β-谷甾醇酯,条件为:反应液5mL上硅胶层析柱,流动相为环己烷/无水乙醚(19∶1,v/v),流速为15mL/h,收集洗脱液,并用TLC检测产物。分离纯化的CLS采用大气压化学电离质谱进行鉴定。 采用高效液相色谱(HPLC)测定酯化率,优化了有机相脂肪酶催化合成CLS的生产工艺:在正己烷介质中,β-谷甾醇浓度为0.05mmol/mL,酸醇摩尔比为1∶1,4A分子筛用量为60mg/mL,酶用量为20mg/mL,在50℃恒温水浴振荡器中连续反应72h,反应酯化率可达72.63%。 CLS的脂溶性实验结果表明:CLS在花生油中的溶解度为45.24%,远远高于β-谷甾醇在花生油中的溶解度1.13%。 研究了CLS对共轭亚油酸(CLA)、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)的抗氧化作用。结果表明:在CLA、AA和DHA中加入β-谷甾醇和β-谷甾醇酯,贮藏一定时间后,其POV都比相应的空白值低,说明二者都具有一定的抗氧化作用,但是β-谷甾醇酯的抗氧化性明显优于β-谷甾醇,且二者的抗氧化效果与其添加量之间没有非常明显的量效关系。 CLS的降血脂动物实验表明,对高脂血症小鼠,以100mg/kg·d的剂量饲喂添加共轭亚油酸β-谷甾醇酯的基础饲料,能明显抑制小鼠总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的升高(P<0.01),并可显著降低动脉粥样硬化指数AI(P<0.01)。对小鼠的肝重、肝系数、肝脏TC和甘油三酯(TG)均具有不同程度的明显降低(P<0.01),表明CLS能明显缓解肝脏的脂肪病变。
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