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目的：MLL(mixed lineage leukemia)基因异常是急性白血病中一种非常常见的染色体异常，大多数发生MLL基因异常的急性白血病预后很差，是血液病研究领域的热点。MLL-AF4阳性的急性淋巴细胞白血病是成人急淋中是仅次于费城染色体的第二大常见染色体异常，出现t(4；11)(q21；q23)易位，形成MLL-AF4融合基因，多数患者对常规化疗耐药，即使行异基因造血干细胞移植也容易复发，是一个独立的预后不良因素。目前其发病机理不清，也缺乏有效的靶向治疗措施，亟需从分子机制揭示致病机理。本研究旨在探讨MLL-AF4阳性急性淋巴细胞白血病中，MLL-AF4原癌基因与调控MLL-AF4的miR-143共同作用，参与MLL-AF4阳性白血病发生发展的机理。为难治复发型白血病提供新的治疗靶点，并为去甲基化药物治疗MLL-AF4阳性急性淋巴细胞白血病奠定理论基础。
材料与方法：利用microRNA靶标反向筛选法筛选可以调控MLL-AF4融合基因的microRNA，突变体实验进一步证实microRNA通过靶向结合MLL-AF4融合基因的3’UTR(Untranslated Regions)调控MLL-AF4融合基因。实时定量RT-PCR及Western Blot观察microRNA异常高表达后MLL-AF4融合基因mRNA及蛋白水平变化。MLL-AF4阳性急性白血病细胞系RS4；11及MV4-11中，转染microRNA，观察对MLL-AF4下游靶基因、白血病细胞凋亡、生长曲线、细胞周期及细胞分化等的影响。实时定量RT-PCR检测MLL-AF4阳性急性淋巴白血病细胞系及其他白血病细胞系中microRNA的表达情况，硫化测序检测microRNA启动子区甲基化状态。去甲基化药物处理MLL-AF4阳性急性白血病细胞系RS4；11及MV4-11，进一步探究表观遗传学调控MLL-AF4表达的机制。
结果：成熟miR-143表达载体可以明显下调MLL-AF4基因3’UTR表达载体的荧光素酶活性，提示miR-143可以调控MLL-AF4融合基因。突变体实验进一步证实miR-143通过靶向结合MLL-AF4融合基因的3’UTR调控MLL-AF4融合基因表达。实时定量RT-PCR及Western Blot证实miR-143异常高表达后MLL-AF4融合基因mRNA及蛋白水平明显下调。MLL-AF4阳性急性白血病细胞系RS4；11及MV4-11中异常高表达miR-143，可以抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。qRT-PCR检测健康人、白血病细胞系及原代白血病细胞中miR-143表达情况，发现MLL-AF4阳性急性淋巴细胞白血病中miR-143表达出现特异性下调，明显低于健康人及不携带MLL-AF4融合基因的其他类型白血病。硫化测序表明在MLL-AF4阳性急性白血病中，miR-143启动子区出现异常高甲基化。去甲基化药物处理MLL-AF4阳性急性细胞白血病细胞系后，细胞明显凋亡，同时miR-143表达上调，加用miR-143抑制剂后可以部分逆转去甲基化药物引起的细胞凋亡。
结论：人类miR-143是一个抑癌基因，它可以特异性下调MLL-AF4融合蛋白，而且在MLL-AF4阳性急性淋巴细胞白血病中出现特异性高甲基化及低表达，从而加剧白血病细胞恶性增殖。体外转染导致异常高表达miR-143，可以诱导MLL-AF4阳性的白血病细胞凋亡，抑制增殖，是一个潜在的治疗靶点。去甲基化药物可以通过上调miR-143表达诱导细胞凋亡，从而为去甲基化药物治疗MLL-AF4阳性急性淋巴细胞白血病奠定理论基础。