论文部分内容阅读
目的:探讨17β-雌二醇对甲状腺乳头状癌细胞Hsp27表达的影响及分子机制。方法:用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理K1和BCPAP细胞不同时间,Real-time PCR检测细胞中Hsp27 mRNA的表达,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT(ERα激动剂)和DPN(ERβ激动剂)处理K1和BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;设计合成ERαsiRNA、ERβsiRNA并转染K1和BCPAP细胞,Western blot检测细胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表达;ChIP检测ERα、ERβ对Hsp27基因启动子的影响;MTT检测细胞存活率;酶标分析仪检测caspase-3活性;免疫共沉淀检测细胞中Hsp27与Procaspase-3的相互作用。结果:用10-8 mol/L的E2处理K1和BCPAP细胞不同时间,随着E2处理时间增加,K1和BCPAP细胞中Hsp27的mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,在24 h达到峰值(P<0.05)。PPT促进Hsp27蛋白的表达(P<0.05),DPN抑制Hsp27蛋白的表达(P<0.05)。E2作用转染ERαsiRNA的K1和BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平降低(P<0.05);E2作用转染ERβsiRNA的K1和BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平升高(P<0.05)。ChIP结果显示ERα能够与Hsp27基因启动子区域结合。MTT和caspase-3活性检测结果发现E2通过ERα诱导Hsp27的上调,可以促进细胞的增殖,同时可以抵抗TNF-α引起的细胞凋亡(P<0.05)。E2分别作用转染ERαsiRNA和Hsp27 siRNA的K1和BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27与Procaspase-3的相互作用均减弱。结论:17β-雌二醇可以通过ERα促进K1和BCPAP细胞中Hsp27表达水平的增高,同时Hsp27具有抗细胞凋亡作用。