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研究目的黑色素瘤分化相关的基因mda-9(又称为Syntenin-1;多配体聚糖结合蛋白sdcbp)是一种促转移的基因,最初被发现是在人转移的黑色素瘤细胞中[1]。在过去的研究中发现,mda-9/Syntenin在黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、多形性脑胶质细胞瘤、乳腺癌、小细胞肺癌、泌尿上皮肿瘤、头颈癌、前列腺癌等的癌中表达明显上调,且与预后呈明显负相关[2-9]。而胰腺癌的高转移性是制约其治疗的重要临床问题。Syntenin在胰腺癌的研究中尚未报到。所以Syntenin作为一种潜在的癌基因,有望成为肿瘤诊断和治疗中的重要生物标志物。在此次研究中发现Syntenin在胰腺癌(PDACs)中的表达水平明显高于癌旁组织,且Syntenin的表达水平与患者的肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级呈明显的相关性,更重要的是Syntenin的表达水平与患者的总的生存、无复发生存呈明显地负相关关系。研究方法1、用104例胰腺癌与癌旁配对组织芯片进行Syntenin的IHC,且进行生存统计分析,收集8例胰腺癌癌与癌旁配对的组织标本进行western-blot和QPCR验证。2、采用crisper技术,构建Syntenin的过表达和敲除稳系,进行transwell、划痕、western-blot检测EMT指标,edu和RTCA实验。3、建立小鼠胰腺癌原位模型及脾脏注射胰腺癌肝转移模型,解剖小鼠观察转移和瘤子大小情况。4、用胰腺癌连续芯片切片,进行syntenin和YAP1的IHC,并统计分析二者相关性。western-blot和免疫荧光检测SDCBP和YAP1的表达。5、阻断YAP1进行划痕、transwell、edu和western-blot检测EMT的指标的实验。6、在对照及稳系加CHX,在0h、30min、2h、3h、4h和6h提取蛋白,western-blot检测YAP1的表达情况,在对照及稳系中瞬转cmyc-YAP1的质粒,重复上述步骤。7、在对照及稳系加MG132处理12h,再加CHX,在0h、30min、2h、3h、4h和6h提取蛋白,western-blot检测YAP1的表达情况。8、在293T和BXPC-3细胞系中分别进行cmyc-YAP1和YAP1的外源和内源的泛素IP实验。9、在293T和胰腺癌细胞中分别进行Syntenin和YAP1的IP实验。构建Syntenin和YAP1的截断质粒,在293T中进行IP实验。10、在对照及稳系中瞬转Flag-YAP1/△TAD的质粒,48h后加CHX,在0h、30min、2h、3h、4h和6h提取蛋白,western-blot检测Flag-YAP1/△TAD的表达情况。11、在胰腺癌细胞中瞬转YAP1的过表达质粒和YAP1的小干扰。Western-blot和QPCR检测Syntenin的表达水平。进行TEAD1及YAP1协转录TEAD1转录调控Syntenin的CHIP及双荧光素酶实验。12、从小分子化合库中筛选出体外可以影响Syntenin蛋白稳定性的药物。在胰腺癌细胞中加药进行western-blot检测Syntenin表达、EMT指标的变化和transwell实验。结果和结论1、Syntenin在癌中表达高于癌旁组织,且与预后呈明显负相关系。2、Syntenin可以促进胰腺癌细胞的侵袭、迁移、EMT和增殖能力。3、Syntenin和YAP1之间存在明显正相关。Syntenin在胞浆、核和膜中均有分布,YAP1主要分布在细胞核中。Syntenin是通过YAP1促进胰腺癌的侵袭、迁移、转移和增殖能力。4、Syntenin可以抑制YAP1的泛素化,进而抑制YAP1的蛋白酶体途径的降解。5、YAP1是通过Flag-TAD结构域和Syntenin的HA-PDZ1、HA-PDZ2结构域结合。6、YAP1与Syntenin在m RNA和蛋白水平正相关。TEAD1可以直接转录调控Syntenin表达,且YAP1可以增强TEAD1转录调控Syntenin的表达。7、雷贝拉唑钠可以显著抑制胰腺癌细胞的Syntenin表达、EMT和侵袭迁移能力。