中药质量控制一直是中药现代化研究领域的重点和难点问题。本课题以知母、黄柏药材及其药对标准提取物为具体研究对象,围绕中药质量分析技术方法进行中药指纹图谱研究。由于中药药对的化学成分复杂,为了保证其质量的稳定性和均一性,需要建立一个有效的质量控制方法进行全面、系统的检测。中药指纹图谱能较为全面的反映药材的内在质量,具有整体性、特征性和稳定性等特点。在不清楚中药全部化学成分的情况下,指纹图谱可以反映物质的群体特征,建立中药指纹图谱有助于更加有效、全面的控制知母、黄柏药材及其药对的质量稳定以及临床用药的安全有效。“药对”,又称对药、对子,专指临床上相对固定的两味药组成的方剂,是中药复方配伍的最简单、最基本和最常见的形式。其配伍符合中医“七情合和”理论组合法度,具备了复方的基本主治功能,成为中医遣方用药的特色之一,具有紧扣病机、功用专一、药简力宏、疗效确切等特点。中药复方配伍规律研究,是目前亟待解决的技术难题,从复方最小单位“药对”入手研究配伍规律,符合从易到难的研究思路,是复方研究的基础所在。本课题以知母、黄柏及其药对标准提取物为具体研究对象,以两者的有效化学成分为主要考查指标,采用HPLC-DAD及HPLC-DAD-ELSD高效液相色谱法,配合已开发的相应软件,对三者进行指纹图谱研究,以期达到更加有效、全面的控制其制剂的质量并建立完善的质量标准,指导实际生产,控制生产环节,切实保证成品质量的稳定性及药剂的安全性,为进一步研究中药复方提供可能。本实验采用HPLC-DAD及HPLC-DAD-ELSD法分别建立了知母药材、黄柏药材以及知母黄柏药对标准提取物的标准指纹图谱并对其主要有效成份进行含量测定;运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件进行分析,对中药材和药对标准提取物的l0批次以上的供试品进行相似度评价。为了确保制备工艺的科学性和稳定性,根据中药材和药对的指纹图谱,标定出了各图谱之间的相关性。实验结果:(1)黄柏的质量控制研究结果表明,川黄柏有效成分总含量平均为4.93%,关黄柏平均含量只有1.51%。川黄柏盐酸小檗碱平均含量为4.37%,远远高于关黄柏的平均含量0.879%,前者含量是后者的4.97倍。而川黄柏的盐酸巴马汀及黄柏内酯的含量都很低,分别为0.025%和0.25%,关黄柏则分别有0.38%和1.2%,分别为川黄柏的15.03倍和5.12倍。川黄柏盐酸药根碱平均含量为0.041%,关黄柏为0.049%,两者中都较少。黄柏的干、枝、根皮中都含有较高的盐酸小檗碱,实验结果表明在根皮中生物碱含量要高于干皮,干皮又高于枝皮。建立了黄柏药材HPLC指纹图谱,采用相似度作为指纹图谱评判参数,计算不同产地黄柏药材HPLC指纹图谱之间以及与对照指纹图谱之间的相似度,采用SPSS聚类分析软件进行指纹图谱研究。确立了黄柏的指纹特征,将15个批次黄柏样品明显的分为川黄柏和关黄柏两个种。(2)知母的质量控制研究对17个不同产地的知母药材测定结果表明,知母中黄酮类成分平均含量为1.79%;皂苷类成分平均含量为5.79%,与文献中报道到的6%左右结果相符,但药材中六种活性成分特别是知母皂苷类成分的含量差异较大。虽然单个成分的差异较大,但药材中黄酮类成分总量以及皂苷类成分的总量差别相对较小。从含量测定结果初步可以看出,河北产地知母的总皂苷含量以及总黄酮含量都高于其他产地,但就总黄酮类成分而言与其他产地的含量比较,差异并不明显。含量测定结果也与指纹图谱评价的聚类分析结果基本吻合。聚类分析软件计算结果虽然不是非常简单明了地对知母药材进行聚类,但其将皂苷含量明显较多的河北产知母聚为最接近一类,将皂苷含量最低的山东、辽宁、宁夏、黑龙江、山西产知母聚为最接近一类。(3)知母黄柏药对标准提取物的质量控制研究建立了HPLC-DAD-ELSD含量测定方法,对10批次的知母黄柏药对标准提取物中的芒果苷、新芒果苷、知母皂苷EⅠ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷B和知母皂苷AⅢ及盐酸黄柏碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱共10个成分的进行了同时含量测定。其次,建立了知母黄柏药对标准提取物的HPLC指纹图谱,采用相似度作为指纹图谱评判参数,计算不同批次知母黄柏药对标准提取物的HPLC指纹图谱之间以及与对照指纹图谱之间的相似度。结果显示,药对标准提取物中各批次间总生物碱,总黄酮及总皂苷的差别较小,各批次基本持平,各批次间的相似度计算结果非常好。实验结论:(1)本课题所用的实验方法科学、可靠,可用于对知母、黄柏药材及药对的定性定量研究。(2)本课题研究结果对建立知母、黄柏药材及药对的科学质量评价方法,指导实际生产,控制生产各环节质量,切实保证成品质量的稳定性及药品的安全性,具有重要意义。