链霉菌139基因ste5和ste6的功能研究

来源 :中国协和医科大学 中国医学科学院 北京协和医学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:philiploo
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  本实验室以往工作已确定了约31.3kb的依博素生物合成基因簇(GeneBankAccessionNumber:AY131229),其中包含22个开放阅读框(ste1-ste22),序列分析发现其中六个开放阅读框参与了核苷酸糖前体的合成(ste6,ste10,ste1l,ste16,ste17andste19),四个开放阅读框可能为糖基转移酶(ste5,ste7,ste15,ste22)编码基因。   为了进一步证明ste6参与依博素的生物合成,我们通过同源交换对基因ste6进行了基因阻断实验,分别构建了基于同源单交换的重组质粒pLH1327和同源双交换的重组质粒pLH1327,对链霉菌139进行转化,分别获得ste6阻断突变株LH9827和LH9828,通过Southern杂交证明ste6基因被成功阻断。我们同时还构建了用于回复实验的质粒pLH9828,对同源双交换阻断突变株链霉菌LH9828进行转化得到ste6回复株LH9829。对突变株和回复株产生的胞外多糖进行了分离纯化,采用G-MS分析确定了其单糖组分变化。结果显示ste6参与了依博素核苷酸糖前体UDP-半乳糖醛酸的合成,表明该基因与依博素生物合成有关。该研究也为依博素结构与生物活性关系的研究奠定了基础。
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