羧基转运蛋白基因是近年来分离出的新基因，在虫生真菌中，它既与穿透昆虫体壁所需的能量有关，也受昆虫体壁的诱导，因此推测是一种重要的毒力因子，但确切功能尚需确定。本研究运用RNA干扰的方法，通过将球孢白僵菌羧基转运蛋白基因BbJEN1沉默来初步研究其功能。　　 实验构建了两种干扰载体：①PRNAi：根据基因库上的BbJEN1mRNA序列，设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pRNA-U6.1-Hygro质粒中，转化大肠杆菌，并对重组质粒进行菌落PCR及测序鉴定。②pbarGPE1-RNAi：根据GenBank中的BbJEN1基因组DNA序列设计两对分别含有特定酶切位点的特异引物，以球孢白僵菌基因组DNA为模板扩增目的基因片段。将正反向目的片段插入pbarGPE1质粒中，转化大肠杆菌，对重组质粒进行菌落PCR扩增及测序鉴定。　　 干扰载体构建成功后，通过对分生孢子的抑制性实验，筛选出潮霉素B对球孢白僵菌的最佳抑制浓度为600μg/mL。采用原生质体转化和芽生孢子转化两种方法转化球孢白僵菌，均获得转化子。其中芽生孢子转化法获得的转化子为7个/μgDNA，原生质体转化法获得的转化子为0.9个/μgDNA。RT-PCR结果显示：构建的干扰载体抑制了BbJEN1的表达。其中有三个干扰载体获得了较好的沉默效果，抑制率分别达到了71％、75％和82％。　　 接着对转化子和原始菌株进行菌丝生长速度、产孢、孢子萌发以及抗逆性等生物学特征进行了测定。结果显示：转化子与原始菌株间生长速率和产孢量差异不显著，表明BbJEN1基因与菌丝生长和产孢无关。二者孢子萌发率无显著差异，但转化子孢子萌发时间却明显滞后：原始菌株的孢子萌发中时为14.24±0.58h，而导入PRNAi-1、PRNAi-2、PRNAi-3和pbarGPE1-RNAi的菌株分别为14.45±0.79h、16.22±1.02h、16.13±1.66和16.00±0.41h。经抗逆性测试发现，各转化子的活孢率均低于野生菌株，其中导入PRNAi-2，PRNAi-3和pbarGPE1-RNAi致使BbJEN1基因沉默的菌株活孢率显著低于野生菌株差，而导入PRNAi-1的菌株与野生菌株差异不显著。这说明BbJEN1基因与抗逆性有关。　　 对马尾松毛虫（Dendrolimus punctatus）进行生物测定的结果显示：对于原始菌株Bb13，最低剂量引起的累计校正死亡率为14.68±5.25％，最高剂量的累计校正死亡率为87.07±7.67％。而基因沉默菌株Bb13-S的最低剂量累计校正死亡率为6.92±4.98％，最高剂量的累计校正死亡率为71.56±4.96％，分别低于原始菌株。野生型菌株Bb13两个浓度2.5×107和1.25×108的致死中时分别为6.49±0.39天和5.57±0.28天，Bb13-S两个浓度2.5×107和1.25×108的致死中时分别为8.09±0.41天和7.17±0.36天，均较野生菌株长1.60天，杀虫速度平均降低26.65％。Bb13的致死中浓度和致死中量分别为2.79×106±0.21×106conidia mL-1和84.12±4.11 conidia mm-2，而Bb13-S的致死中浓度和致死中量分别提高为1.27×107±0.19×107 conidia mL-1和382.92±24．32 conidia mm-2，相对野生型菌株平均增加了3.6倍的孢子用量。从致死中时、累计死亡率、致死中浓度和致死中量看，改造后的菌株Bb13-s的毒力较野生型菌株有明显下降，从而证明BbJEN1基因是一个与毒力相关的基因。